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[分享] 293T 细胞培养秘籍大公开

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发表于 2025-6-6 10:48 | 显示全部楼层 |阅读模式

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一、培养条件解析1. 培养基选择:高糖DMEM培养基是293T细胞的理想之选,它能为细胞提供充足能量。同时,需补充10%胎牛血清(FBS)或血清替代物。像我们课题组长期使用XR血清替代物,品控稳定,细胞状态一直保持良好。血清批次差异对细胞状态影响显著,选对血清至关重要。
2. 双抗添加:1%双抗加与不加可视情况而定。我个人培养细胞时选择不加双抗,避免双抗可能带来的潜在影响。
3. 完全培养基配制小窍门:关于500mL培养基配制时是否倒出50mL再加血清的问题,若近期需用无血清培养基,倒出50mL更合适;若无需使用,直接添加50mL血清即可,无需在这类小问题上纠结。
二、应对293T细胞特性的技巧 1. 贴壁性弱与复苏:293T细胞贴壁性较弱,复苏后24小时内务必避免扰动。若使用DMSO冻存细胞,复苏时离心去除冻存液后再转入培养瓶。
2. 换液要点:因其贴壁不紧,换液时动作一定要轻柔,贴着侧壁缓缓添加液体,防止细胞脱落。
3. 传代技巧:当细胞密度达到80 - 90%时进行传代。消化时可不使用PBS清洗,吸干培养基后,向T25培养瓶加入500μL胰酶,转动培养瓶使胰酶均匀分布,室温消化30秒,随后加入完全培养基终止消化,轻轻吹打几十下,过度吹打易致细胞聚团,按1:3传代即可。
4. 冻存策略:T25培养瓶长满后可冻存两管,复苏一管细胞两天就能长满。要注意,293T细胞在密度高且营养不足时易大片脱落,T25培养瓶建议加入6 - 7mL培养基。从培养箱拿出细胞处理时,动作要轻,避免液体大幅晃动。例如在包病毒时,T25长满后分成3份铺到大皿,两天刚好长到70% ,为后续实验提供良好细胞状态。  
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