求助｜有没有做流式细胞检测的大佬？

乔帮主

我的实验设计是验证死细菌与细胞的结合我用了带FITC的直标荧光抗体来标记死细菌，用带APC的直标抗体来标记细胞。
我昨天想做一个抗体的预实验确定抗体最佳使用量，做一个抗体滴定。抗体储备液是5mg/ml，我设置了0、1、2、4、8、12ug/ml的浓度组，准备根据染色指数来选择。
我是选择100ul的体系，先用50ul重悬1E8的细胞量，再加入5 ul 1%的BSA避光15min封闭死细菌.（但是我没有离心去除1％BSA）
然后再将含有对应浓度的抗体稀释到50ul，加入到上一管中，冰上孵育30min .
结束后直接加1mlPBS混匀，然后离心去上清，重复一遍洗涤，加500ulPBS上机检测。
但是检测出来没有荧光，和空白组没有差别，我想问问我这个实验过程有些什么问题啊？我改进一下，求求各位大佬指点
还有一个问题是，我检测的是细胞与死细菌结合，我想问一下我需要染死细胞嘛，染死细胞就会染上死细菌，死细胞对实验影响很大嘛，我可以不设置这个染色嘛

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