做实验不断失败，被骂到哭是一种怎样的体验？

青草

如上
原文地址：https://www.zhihu.com/question/43688131

队长是我

谁没为实验掉过几滴眼泪呢……2023复工第一天，师弟面对做不出的实验，心里想的都是“赶紧毁灭吧”，一点没有迎接新年的喜悦之情。
如果初入实验室时，能够接手师兄师姐的实验，顺带用用师兄师姐传下来的protocol就很幸运了。那要是很惨的被放养，自己摸索protocol，可就要走一步看一步了，毕竟网上五花八门的protocol，信息参差不齐，步步是坑，这要是没有一份靠谱protocol傍身，迟早要脚下一黑的。
别怕，我为大家带来了一份超全面实验protocol,细胞侵袭、细胞凋亡、细胞黏着、细胞周期等，不仅有细胞培养相关实验，还有包括不同研究水平实验技术Protocol，不同实验方法全流程，WB实验流程、注意事项、数据处理及写作、IHC实验流程、操作技巧、注意事项、图像分析等相关实验的详细步骤，全都是经过前辈们无数次验证过的，希望对大家的实验有帮助。
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部分截图：
1
不同研究水平实验技术protocol
针对不同研究水平的同学，我们提供不同的实验技术Protocol，帮助科研er解决实验屡战屡败难题，拓展研究思维并发展未来研究新方向。


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常见细胞动物实验技术总结！
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3
不同实验方法全流程
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从实验原理、实验目的到实验材料、实验步骤等全流程分享，带你剖析实验每个步骤的操作要点，各个击破每个步骤的易错点。
细胞增殖、周期和凋亡是在生物医学领域内非常常见的表型，表型的最大特点就是可以通过特定的实验手段进行检测。
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分子机制↓↓↓
解螺旋打包整理了9条常见信号通路的标志物总结、信号通路关键分子和抑制剂、回复实验策略、蛋白亚细胞定位、核酸亚细胞定位、染色体定位、细胞典型标志物等。


细胞交互↓↓↓


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4
WB实验流程、注意事项、数据处理及写作
新上手的小白想要得到一张条带清晰、没有杂带、背景干净的图片，没有WB实验干货怎么行！


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5
IHC实验流程、操作技巧、注意事项、图像分析
IHC实验操作技巧和注意事项做了详细的整理总结，简直是保姆级教程~
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如果当初在研究PCR时，能针对这些问题有一个系统的学习和解答，快速出“新手村”就好了。
在和同学们交流的过程中，我发现大家普遍遇到的问题有：
不知如何有效设计引物；
PCR电泳无扩增条带；
扩增产物不符合要求；
条带总和你玩“捉迷藏”……
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• 课程涉及抽提细胞RNA、反转录、PCR物设、Blast引物验证、引物库使用及引物评价和修改，零基础学员亦可快速掌握实验精髓；
  
• 从原理、流程、试剂盒到注意事项，各个要点皆事无巨细，100%玩转PCR实验
  
• 实验结果全面解读，5分钟内挖掘结果关键信息，快速产出符合SCI的结果图；
  
• 分享实验小技巧，针对疑难杂症对症下药，攻克实验难题避免实验过程手忙脚乱；
  
• 快速提炼文献中实验信息，学习相关实验技能，快提炼出独属于自己的实验方案。
  

你将掌握↓↓
1.从文献提炼实验套路的能力
还原文献场景，复现材料方法和结果部分写作套路
2.快速通关PCR
学会用软件设计引物实验，掌握PCR实验详细步骤，提高PCR实验效率
3.实时解决实验疑难杂症
细节决定成败，实验细节的讨论，避免实验中的手忙脚乱


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讲师介绍
猫大，中国科学院上海生命科学研究院博士，现于上海交通大学医学院从事博士后研究工作，主要研究方向为表观遗传与基因转录调控。
猫大硕士毕业后曾在技术公司担任实验室主管，又经博士阶段系统科学训练，实验技能极为丰富全面。
亲自操刀了《酸谈实验室》课程，手把手地教学学员细胞、分子生物学实验实操技巧。授课风格严谨务实、活泼可爱，带领学员走出实验迷雾。
在一周学会PCR医学SCI实验课中，不仅有细节慢慢的实验经验总结，还有亲身示范实操过程，直观真切、通俗易懂，让实验小白也能轻松掌握！






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PCR产物出现假阳性（即空白对照出现目的扩增产物）怎么办？
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提高PCR特异性的策略有哪些？
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长长的路

大二的大创，做了三次毒性试验，都有问题，那段时间就是抑郁的，自己偷偷哭，家人朋友一概不知，现在想想没什么大不了的，

队长是我

乍一看我以为是我发的问题……我也有过一样的，不过我有个不错的老板，不过他不经常在国内。

我们实验室还有另外一个小老板，负责管理实验室的日常运转，但他已经很多年没有发过像样的文章了，估计他心里也很介意这一点，所以总对我们这些不是他学生的人抱有怀疑和戒心（说实话他性格真的有问题，他的几个学生1个退学2个换导师大弟子做了博后实验室在我们斜对面见面当没看见）。
总之呢，他喜欢给我们小鞋穿并辅以言语打击（在我们老板不在的时候）。经常说我们只听我们老板的不愿意听他的（其实就算真是这样我也不觉得有什么问题），我们做的课题相差没有十万也有八千里吧，实验动物都不一样，碰到一些需要相关领域经验判断的问题时，其实他根本不知道还要强行带领我们前进，所以经常会有些让人无语的要求有时候也会与我们老板的要求相冲突，这时候如果我们按他说的做如果无效那就是我们操作有问题，如果我们不愿意做那就是不服从他的管理（有有效的的时候吗？我印象中没有），三天两头在我们老板那告我们的状。

有次老板在国外，电邮要求我做某个基因的qPCR，但拿去问他时他觉得没必要，老板一直催所以我还是做了，他知道后一直跟我说做这个没必要是浪费试剂是我理解错老板的意思了，不停说了十几分钟吧，但我说我事前已经跟老板沟通过了没问题而且是有正当理由的，他就是不认同我的说法继续语气不好地指责，我委屈得很就哭着跑出去了……


现在我已经彻底不甩小老板了，逮着机会就在老板那给他上眼药，我从不低估老板的智商所以目前还没出事……
反正我要毕业了，毕业的事也不归小老板管，呵呵。
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但是我好像没说到做实验不断失败的问题，补充一下。

首先，只要你不是运气逆天的人，以及实验室经费多的没处花，实验失败就是一件很平常的事。

但我要说的是，如何在不断失败的情况下不会受到过多的责难（仅针对讲道理的老板）。

读生物这件事你首先要勤奋，多跟老板沟通，如果你老板是愿意指导学生的人，你可以将实验中遇到的问题告诉他与他一起讨论，先摸清楚他的脾气，问的问题不能太低级（需要积累多看文献）

如果你老板是不好相处的人，指点谈不上，平时神龙见首不见尾，想问问题找不到或者说不出个二四六来，那么你可以多与高年级学生打好关系（我是苦逼的第一届学生），多一起吃饭就好了（不需要请客），多和他们请教，但如果出了差错千万不能把过错推到他们身上，这是人品问题；如果像我一样没有师兄师姐罩着的话，就只能辛苦你自己找文献，看文献是非常有用的，同一个实验不同文献上做法不一样，这个时候你需要理解protocol上每一步操作的意义，有一定积累后才能够判断哪些操作更加适合自己的实验。

但看文献和向别人请教是不冲突的，在不断的印证过程中你才会进步。我老板常说，一定要注意实验技术中的细节问题，要做就要把这个实验做到最好，就算让别人去做，最好也只能做到你这样了……

一般实验室会有些既定的protocol，以及一些试剂盒有详细的操作步骤，不要轻易改动。

总之，我觉得生物最需要勤奋，仔细，抗打击，还有运气。后两个有没有只有你自己知道，但是勤奋和仔细光你自己知道不行，你还要让你老板领会到你确实很勤奋做实验也很仔细，勤奋可以表现在实验数据的量，仔细表现在你综合考虑了多个方面的判断最终作出了你认为最符合你实验的操作并与老板进行了交流，不一定是对的，但是老板只要对你有了这样的认识之后讲道理的都不会苛责你了。

遇到问题后，我的建议是先找文献，再与高年级学生讨论，再不行找老板。最后是重复重复再重复……


祝所有生物狗都发子刊！（自认为这样比较接地气）




（图片来自网络，侵删）

检验医师

作为一个学生物的过来人，我只能说这样的情况实在是太正常了。除了极少数天选之人，在生物坑里摸爬滚打过的，哪有没经历过实验失败的，区别只在于次数多少、频率高低而已。我自己在刚开始读研时就经历过连续两三个月做PCR扩增不出目的条带的情况，把所有可能的情况都考虑了结果还是失败，最后连脾气还算不错的老板都为此发了飙。后来，更换了研究方向，再做其他的PCR时却又一切顺利了。那次实验失败的经历到现在对我来说还是记忆犹新。
不过，既然邀请我回答，仅仅是谈谈经历，吐吐苦水未免也太没有诚意了。我来说点我觉有可能有点帮助的东西吧。
生物学实验本身就有其特殊性，不管是分子生物学实验、免疫学实验还是动物实验等等，其反应过程对于我们实验者来说往往是不可见和不可控的。所以，当实验结果符合预期时，那么万事OK，一旦出现结果不对或者没有结果的情况，那么问题就复杂多了。你可能需要一个步骤一个步骤的去考虑和排除影响因素，然后再重复实验，以期能得到预期的结果。
所以，实验失败了，不要气馁，可以从以下几个方面来进行考虑：
1.实验设计，就是从整体上看看这个实验的预期结果是否能实现。因为现在有很多研究都是探索性的，早期做出的实验设计和预期结果也只是理论上的推测，未必就一定能通过实验得到，所以需要根据国内外的文献资料来佐证实验构想，及时和导师进行沟通交流。实验设计是起点，起点错了，那么后面只会错上加错。因此，如果发现问题要及时纠正。
2.实验操作，我上面讲过实验的结果受到很多因素的影响，我们能做的就是尽可能降低人为操作带来了的影响，这就需要我们在实验时养成良好的操作习惯。当然，做实验也是熟能生巧的过程，当你把某项实验成功的做上几百次的时候，你基本上可以随心所欲的操作了。因为实验的成功要点基本烂熟于心了。不过，千万不要小看良好习惯的作用，它会在你刚开始实验生涯时给你很大的帮助，所以请尽可能的养成好的习惯。
3.实验结果，有时候得不到预期的结果或者得出相反的实验结果，并不一定就意味着实验的失败，这时你把结果结合理论加以分析说不定能得到有意思的发现。历史上有很多伟大的发现就是在失败中发现的，青霉素的例子已经举烂了，我就不赘述了。
4.实验失败，我最开始说了实验失败在读研或读博的过程中犹如坏天气一样时有发生，但做失败了的实验却未必真的一点价值就没有。因为，它会促使你去更深入的学习和了解这项实验，分析实验失败的各种原因，逐一排除，这本身就是一个提高的过程。还是拿我自己举例子，经过那次惨痛的P不出的经历，我在那段时间里把关于PCR失败的各种因素都学习了一遍，所以在以后即便我会偶有失手时，我也会迅速的找到问题的起因，从而走上正轨。
实验失败，我们并不期盼；但是也不应该惧怕，这是我们加深学习的契机。
最后，说一下心态，有时候开展一项实验可能花费较长的时间，一旦实验失败了，确实会造成比较大的心理落差，但是千万不能气馁和绝望，学生物，专业知识和素养都是次要的，养成一个良好的心态绝对受益终身。
关于老板的责骂，我个人觉得应该多和导师沟通，导师有时生气的不是你老是实验失败，而是实验失败了你却不知道为什么。所以，自己主动和老板分析实验失败的原因，做出自己的推测和假设，表现出自己虽然这次失败了，但是离成功也不远了。我相信老板应该会体谅的，毕竟大家都是过来人嘛。
再额外多说一句，做科研千万别在一棵树上吊死，有时候这条路行不通，可以试试别的路子，有道是“山穷水复疑无路，柳暗花明又一村。”
祝早日脱坑，哈！

长长的路

为何邀我回答这个问题…………