PCR实验样本收集流程

非诚勿扰孟非

1) 组织样品：

采集新鲜组织，组织块以 PBS 或生理盐水清洗干净，切为小块，放入 2ml 冻存管中，立即转入液氮或-80°C 冰箱中保存。避免标本反复冻融，提供量不低于 100mg/样本。

2) 细胞样品：

a、贴壁细胞：

取大约 1*107 贴壁细胞（例如胰酶消化方法），低速离心去除培养液，用 PBS 悬浮洗 1-2 次，转入 1.5ml 离心管中，低速离心沉淀细胞，弃去 PBS，只保留离心管底部的细胞沉淀，立即置液氮中快速冷冻（如果没有液氮，这步可省略）。液氮冷冻半小时后，保存于-80°C 冰箱，干冰运输。提供量至少 1
×107 细胞。
b、悬浮细胞：
低速离心去除培养液，用 PBS 悬浮洗 1-2 次，转入 1.5ml 离心管中，低速离心沉淀细胞，弃去 PBS，只保留离心管底部的细胞沉淀，立即置液氮中快速冷冻（如果没有液氮，这步可省略）。液氮冷冻半小时后，保存于-80°C 冰箱，干冰运输。提供量至少 1×107 细胞。

3) 血液样品：

a、如果需要血细胞（淋巴细胞和单核细胞）：

收集新鲜抗凝血（2-3ml，EDTA 为佳），4 度保存，1-2 天之内密度梯度离心法分离出淋巴细胞（具体流程参考购买的淋巴细胞分离液说明书），保存于
-80°C 冰箱，干冰运输。

b、如果需要血清/血浆：

收集新鲜血 2-3ml（抗凝或者不抗凝），4 度保存，1-2 天之内低速离心分离出血清/血浆，保存于-80°C 冰箱，干冰运输。
对于 WB 实验而言，血清或者血浆标本，属于特殊类型，需要前期进行去除高丰度蛋白（如白蛋白和免疫球蛋白）后，才可以开展 WB 实验。
(备注：避免将全血标本放入-20°C 或者-80°C 冷冻保存，这样会影响后续的分离效果。)
c、保留全部血液中的 RNA，简便但昂贵的方法 Paxgene 管
（BD 公司，货号：762165）采集全血，采血混匀后在 18～25℃可以保存 3 天，2～8℃可以保存 5 天。在-20°C 或 -70°C 条件下至少稳定 50 个月， 抽提需要搭配适合 Paxgene 采血管的试剂盒。

注：标本收集流程同 WB 实验，但对标本的量要求更高：组织样品＞400mg/样品； 细胞样品＞2×107/样品，尤其避免标本反复冻融（否则会破坏蛋白与蛋白之间的相互作用），干冰运输。

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