蛋白提取&蛋白定量分析

乔帮主

1.蛋白提取
1）蛋白裂解液与裂解环境：对于普通蛋白的提取，如实验时间无特殊，选用普通的蛋白裂解液、冰上裂解即可；对于极易受环境影响的蛋白（比如低氧相关蛋白，HIF-1等），研究报道将细胞从低氧培养箱中取出2-3min即可影响HIF-1表达，因此宜选用超强效蛋白裂解液，并在低氧培养箱（37℃）中快速裂解。
2）组织蛋白提取：在组织蛋白提取过程中，一般推荐加用蛋白裂解液（磷酸酶和蛋白酶抑制剂）后，冰上研磨、匀浆化处理组织。组织来源不同，蛋白的产出亦不相同。
植物蛋白提取试剂盒（组织样品），货号：K296-50；
核蛋白与胞浆蛋白提取试剂盒，货号：AMJ-KT0006；
细胞膜蛋白提取试剂盒，货号：KA3702；
组蛋白提取试剂盒，货号：OP-0006
2.蛋白定量
蛋白定量的方法有很多种，应用较多的主要有两种：BCA蛋白定量检测法和Bradford蛋白定量检测法，市售的蛋白定量试剂盒也多基于上述两种检测方法而开发的。两种方法均需配制蛋白标准品，蛋白与定量试剂经过一定时间的反应（BCA法反应为37℃、20-30min，Bradford法反应一般为37℃，5min），酶标仪读取样品的OD值，绘制的蛋白标准曲线，依据标准曲线计算WB蛋白的浓度。
BCA法与Bradford法应如何选择？
这主要由样本中的干扰物质决定。如果你的蛋白抽提试剂中含有大量去垢剂且不含有螯合剂、还原剂时，可使用BCA法；如果你的蛋白里含有EDTA等金属螯合剂或者含有还原型物质，且不含有去垢剂时，可使用Bradford法。
BCA蛋白质定量试剂盒（兼容SDS），货号：AMJ-KT0009；
Bradford蛋白质定量试剂盒（兼容DTT)，货号：AMJ-KT0009

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