核酸提取总是出问题？三个细节帮助你避免失败

HaHa

面对纷繁复杂的样本，每天的核酸提取可以说是费时费力。如果短时间内想稳定拿到实验结果，那么快速、稳定的核酸提取方法就显得十分重要。
比较常见的提取方法有沉淀法，离心柱法和磁珠法，提取步骤基本类似分为裂解、洗涤和洗脱。核酸提取需要注意的细节较多，一处出错都会导致结果的失败。常见的问题主要有产物得率低、产物降解或者试剂残留。

针对这些问题，下文整理给出了具体的应对方法，希望能够帮助大家避坑！

一、提取的核酸得率低

● 样品量与试剂的配比要控制在一定范围，避免超过裂解能力；
● 破碎研磨的步骤处理细节很重要，一定要充分研磨，这是核酸提取的首要条件；
● 在洗脱的步骤，使用足量的洗脱液洗脱并充分混匀，避免有团块残存；
● 实验耗材要匹配，如不同的吸附柱或磁珠的核酸吸附能力不同，也会影响核酸的得率。

二、提取核酸出现降解

● 提取的样品量要符合试剂的配比，尽量控制样品量达到合适比例；
● 每个步骤都要注意充分的混合均匀，避免团块的残留影响实验结果；
● 在洗脱时，时间过长或者温度过高，核酸有可能会降解；
● 样本切记不可反复冻融，提取的样本要注意在合适的温度保存，长期保存尽量 -80 ℃。
三、提取到的核酸纯度不够高，甚至抑制物残留影响下游实验

● 样本量和裂解液等试剂的配比要尽量控制到合适的范围；
● 混合均匀以确保裂解充分和没有团块残留；
● 晾干的步骤要充分，否则可能会导致醇类等杂质的残留；
● 磁棒振荡幅度太小或混合时间太短，磁珠上有杂质残留会影响磁珠吸附核酸的能力。


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参考

• ^文章来源：生物学霸
  

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