微生物检测中心，阳性实验的具体流程是如何的？

营养师

微生物检测中，阳性实验的具体操作都有哪些？

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大力水手

阳性对照实验操作步骤
一、实验准备
‌阳性菌株选择‌
根据检测目标选择标准菌株（如金黄色葡萄球菌26003、大肠杆菌44102等），菌株需通过活力和纯度验证‌。
‌培养基与试剂准备‌
配制适合目标菌株生长的培养基（如营养琼脂、LST肉汤等），灭菌后备用‌。
‌器材灭菌‌
平皿、吸管等器材需经高压灭菌（121℃、30分钟），操作台提前用紫外灯消毒40~60分钟‌。
二、阳性菌液制备
‌菌种活化‌
将冻存菌株接种至肉汤培养基，37℃培养18~24小时至对数生长期‌。
‌梯度稀释与活菌计数‌
取新鲜培养液进行10倍梯度稀释（如稀释至10⁻⁶~10⁻⁷），采用涂布平板法或倾注法测定活菌浓度‌。
控制加菌量为50~100 CFU/批次，避免过量干扰实验结果‌。
三、加菌操作
‌模拟污染过程‌
在供试品稀释液中定量加入阳性菌液（如取0.1ml 10⁻⁶稀释液），确保与待测样本同步处理‌。
‌严格分区操作‌
加菌操作需在独立区域完成，避免交叉污染；操作全程在酒精灯附近进行‌。
四、培养与观察
‌同步培养‌
将加菌样本接种至选择性培养基（如伊红美蓝琼脂用于大肠杆菌），置36±1℃培养24~48小时‌。
‌结果判读‌
阳性对照组应显示典型菌落特征（如大肠杆菌在EMB培养基上呈金属光泽紫黑色菌落）‌。
五、结果验证
‌生化确认‌
挑取菌落进行氧化酶、硝酸盐还原等生化实验，验证目标菌特性（如金黄色葡萄球菌过氧化氢酶阳性）‌。
‌复检流程‌
初筛阳性结果需通过不同培养基或分子检测（如PCR扩增16S rRNA基因）复验，避免假阳性‌。