手把手教学｜紫外分光光度计的使用方法

生物科研实验室

紫外分光光度计是实验室中常见的分析仪器，广泛应用于化学、生物、医药、环境检测等领域。无论是测定溶液浓度、分析物质纯度，还是研究反应动力学，它都是科研和实验教学的得力助手。 但很多新手在使用过程中常因操作不当导至数据偏差或仪器损坏。 一、紫外分光光度计简介 1. 工作原理 紫外分光光度计基于朗伯-比尔定律（Lambert-Beer Law），通过测量物质对紫外-可见光的吸收特性来分析样品浓度。 
公式：A=ε•c•l 其中： •A：吸光度 •ε：摩尔吸光系数  （与物质性质相关） •c：溶液浓度 •l：光程（比色皿厚度） 2. 仪器组成 •光源：氘灯（紫外区）和钨灯（可见区） •单色器：将复合光分离为单一波长 •样品室：放置比色皿 •检测器：将光信号转化为电信号 •数据处理系统：显示并分析吸光度值 3. 应用场景 •定量分析（如DNA/RNA浓度测定） •定性分析（扫描物质吸收光谱） •动力学研究（监测反应速率） 二、操作步骤 1. 开机准备 1.检查环境：确保仪器放置平稳，室温10-30℃，湿度≤80%。 2.预热：打开电源开关，氘灯需预热15-30分钟（不同型号时间不同，参考说明书）。 3.选择光源：紫外区（200-350nm）使用氘灯，可见区（350-900nm）切换至钨灯。 2. 样品制备 •空白对照：使用与样品溶剂相同的溶液（如蒸馏水）作为参比。 •样品处理： •液体样品：确保无悬浮物，必要时离心或过滤。 •固体样品：溶解后定容至合适浓度（吸光度值建议在0.2-1.0之间）。 •比色皿选择： •石英比色皿：适用于紫外区（200-350nm）。 •玻璃比色皿：仅用于可见光区（＞350nm）。 3. 校准与测量 步骤1：基线校准 1.将空白溶液倒入比色皿至3/4高度（避免溢出）。 2.用擦镜纸清洁比色皿透光面（手指勿接触光面！）。 3.放入样品室，关闭盖子。 4.按“Auto Zero”或“Blank”键完成基线校准。 步骤2：样品测量 1.倒出空白溶液，用待测样品润洗比色皿2-3次。 2.装入样品溶液，擦拭后放入样品室。 3.设置波长（例如DNA检测选260nm，蛋白质选280nm）。 4.读取吸光度值，记录数据。 步骤3：扫描光谱（选做） 1.进入“Scan”模式，设置波长范围（如200-400nm）。 2.设定扫描速度（常规分析选“中速”）。 3.点击“Start”扫描，观察吸收峰位置。 4. 数据处理与保存 •直接记录吸光度值，或通过软件导出数据。 •部分仪器支持浓度直读功能：需预先输入标准曲线方程。 三、注意事项 1.比色皿使用规范 •区分石英和玻璃材质，不可混用。 •装液时避免产生气泡（倾斜45°沿壁倒入）。 •每次使用后立即清洗，防止残留腐蚀。 2.波长选择禁忌 •避免在光源切换区（如340-360nm）长时间工作，可能损伤仪器。 3.样品浓度控制 •吸光度＞1.0时，稀释样品重新测量，避免偏离朗伯-比尔定律。 4.仪器保护措施 •关闭样品室盖后再测量，防止杂散光干扰。 •氘灯关闭后需冷却30分钟再重启，否则缩短寿命。 5.特殊样品处理 •强酸、强碱或有机溶剂需使用耐腐蚀比色皿，测量后彻底清洁。 四、日常维护与故障排查 1. 清洁与保养 •每周维护： •用酒精棉擦拭样品室，清除灰尘。 •检查比色皿架是否松动。 •每月维护： •校准波长精度（使用标准滤光片）。 •清洁光学窗口（需专业人员操作）。 2. 耗材更换 •氘灯寿命：约1000小时，出现基线噪声增大时需更换。 •硅胶干燥剂：样品室内的干燥剂每月检查，变粉红色后烘干或更换。 3. 常见故障处理 故障现象 可能原因 解决方法  基线漂移   光源不稳定 预热30分钟或更换氘灯  吸光度值异常 比色皿污染 用稀盐酸浸泡后超声清洗  仪器无法开机 电源接触不良 检查插座和保险丝