干货分享 | Real-time PCR（原理、材料仪器、步骤）上

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原理
从细胞或组织中提取出来的 RNA，经过反转录成 cDNA 后，以 cDNA 为模板进行 PCR 扩增，进而检测目的基因的表达，能检测极为微量的 RNA 样品。
用途
检测目的基因的表达
材料与仪器
RT-96 孔板或 RT-8 连管、引物、反转录试剂、RT-检测试剂、双蒸水、离心机、RT-PCR 仪
步骤
1.基因组 DNA 的去除。
一般现在的反转录试剂都配备了 DNA 酶，用以去除 RNA 样品中混有的基因组 DNA，避免后续检测过程中基因组 DNA 可能对检测的影响。通常取 0.5-1μg RNA 样品，按照试剂中的反应条件，去除基因组 DNA。

2. RNA 反转录。
按照试剂盒的说明，在上述体系中加入相应的酶等成分，进行反转录。

3.转录产物的稀释。
PCR 检测程序中，产物都是以指数增长的，反转录得到的体系较少，有的时候同一个样品需要检测多个基因的表达情况，为了加样的准确性，一般会将转录产物进行稀释，通常情况下将转录产物稀释 5-10 倍。

4.PCR 上样检测。
为了减少误差，会先将同种成分配制成一个体系，再分装至 8 连管或 96 孔板中，如：检测试剂（包含酶、探针、buffer、离子等）、前后引物、水等可以配制在一起，最后再往孔中加入对应的反转录产物。加样完成后，上机检测。

5.下机，分析数据。
下期我们继续讲解Real-time PCR的注意事项和常见问题。点赞收藏+关注，让你试验操作不迷路~

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