建议收藏！实验动物组织标本（科研）病理检测的取材与保存方法

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一、引言
在生物医学研究中，动物组织标本的病理检测是揭示疾病本质、探究疾病发生机制的重要手段之一。而在病理检测之前，组织标本的正确取材与保存对于保证实验结果的准确性和可靠性具有至关重要的作用。本文将从石蜡切片、冰冻切片以及电镜切片三个方面，详细阐述动物组织标本的取材与保存方法，以期为科研工作者提供有益的参考。
二、石蜡切片
石蜡切片技术因其操作简单、结果稳定而广泛应用于病理检测中。该技术主要用于HE染色、免疫组化、特殊染色等多种实验。在进行石蜡切片取材与保存时，需注意以下关键步骤和细节：
2.1 标本的选取
在进行石蜡切片前，首先要选择合适的动物组织标本。标本的选择应根据研究目的、病理类型和检测要求等因素进行。通常，应选择病变明显、代表性强的区域进行取材。
2.2 及时固定
为防止组织自溶和细胞形态的改变，固定是石蜡切片中至关重要的步骤。通常使用10%中性福尔马林固定液（主要成分为甲醛）进行固定。固定液应尽早加入，通常要求标本离体后的30分钟内进行固定，以确保固定效果的最佳。
2.3 固定液的充分使用
固定液的体积应至少是组织体积的4-10倍，以确保固定液能够充分渗透和覆盖组织样本。这样可以保证固定液与组织充分接触，提高固定效果。
2.4 切开大组织
对于较大的组织样本，应进行多切面切开，以便固定液能够更好地渗透和固定整个组织。这有助于避免组织内部未固定或固定不充分的问题。
2.5 特殊处理
对于特定的组织类型，如肾脏、肠组织等，可能需要进行特殊处理。例如，肾脏通常要求进行矢状面切开；肠组织用于制作瑞士卷时，需要先剪开肠腔并卷成卷状，然后再进行固定；而含有骨质、钙化的组织还需要脱钙液进行脱钙。
2.6 容器选择
固定后的组织样本会变得硬和定形，因此选择宽口、宽底的容器有助于方便将组织标本放入和取出，避免因容器口径过小而损坏固定后的组织。
2.7 固定时间控制
固定时间的长短直接影响固定效果。固定时间太短可能导致固定效果不佳，组织自溶的风险增加；而时间过长则可能影响后续的制片和染色效果，同时会降低抗原的活性。因此，应根据组织类型和固定液浓度等因素确定适当的固定时间。一般来说，固定时间通常在12小时到72小时之间较为合适。
2.8 储存条件
固定后的组织标本应放置在常温、阴凉、干燥的环境中储存，并避免阳光直射和高温。同时，应确保储存容器的清洁和密封性，防止细菌、霉菌等污染。在储存过程中，应定期检查固定液的颜色和气味等变化，如有异常应及时处理。
三、冰冻切片
冰冻切片技术常用于免疫荧光等分析实验，对组织标本的保存和制片要求更高。在进行冰冻切片取材与保存时，需注意以下细节：
3.1 新鲜组织
冰冻切片要求使用新鲜的未经固定处理的组织标本。这是因为固定过程可能影响细胞内的酶活性和抗原性，从而影响实验结果的准确性。因此，在取材时应尽量选择新鲜、无损伤、无污染的组织样本。
3.2 及时制片
为防止组织自溶和细胞活性丧失，应尽快制备冰冻切片。通常建议在组织标本离体后30分钟内完成制片过程。在制片过程中，应尽量避免对组织的机械损伤和温度波动，以保持组织的形态和结构。
3.3 避免沾水
水分会在冰冻切片过程中形成冰晶，影响切片质量。因此，在制片过程中应尽量避免组织沾水。如果标本上有血液或液体残留，应使用吸水纸轻轻擦拭干净，而不是使用水冲洗。
3.4 超低温保存
如果无法及时制备冰冻切片，可以将组织标本放入-80℃冰箱进行冻存。这样可以保持组织的稳定性，避免其自溶和细胞活性丧失。但需要注意的是，长时间冷冻可能导致组织结构和细胞形态的破坏，因此应尽早处理。
3.5 冰冻切片保存
一旦获得冰冻切片，应及时将其保存在适当的条件下。一般来说，应将切片放置在冷冻存储盒中，并放置在-20℃或更低的温度下保存。在保存过程中，应定期检查切片的形态和活性变化，如有异常应及时处理。
四、电镜切片
电子显微镜（电镜）在揭示生物结构与功能关系方面具有重要作用。在进行电镜切片的组织标本的取材和保存过程中，需要注意以下几点：
4.1 合适取材的部位：要尽可能准确的选择具有代表性的区域进行电镜切片制备，确保样本中包含所需的结构和细胞类型，通常需要结合光镜定位。
4.2 尽快固定：固定是防止组织结构和细胞形态变化的关键步骤。通常组织从活体取下后尽快（1-3分钟内）浸入预冷（4℃）固定液中。
4.3 避免机械损伤：在切割组织样本时，要使用锋利的刀片和轻巧的操作，以避免造成机械损伤。
4.4 低温保存和操作：低温（4℃）保存和操作可以降低酶的活性，防止组织自溶。
五、总结（如下图）



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