IHC、ELISA 与 WB 实验之间的区别？

笑看风云

很多朋友知道免疫组化、Western、ELISA实验用于蛋白检测，但是对于它们之间的区别却不清楚。今天给大家分享下这几种实验方法的区别。
免疫组化、Western、ELISA，免疫学三大工具，分别用于定位，定性和定量。

IHC(免疫组化Immunohistochemistry)


是融合了免疫学原理(抗原抗体特异性结合)和组织学技术(组织的取材、固定、包埋、切片、脱蜡、水化等)，通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素)显色，来对组织(细胞)内抗原进行定位、定性及定量的研究(主要是定位)。样本是细胞或组织，要在显微镜下观察结果，可能出现膜阳性、质阳性和核阳性。
ELISA(酶联免疫吸附试验Enzyme linked immunosorbent assay)


用到了免疫学原理和化学反应显色，待测的样品多是血清、血浆、尿液、细胞或组织培养上清液，因而没有用到组织包埋、切片等技术，这是与免疫组化的主要区别，操作上 开始需要将抗原或抗体结合到固相载体表面，从而使后来形成的抗原-抗体-酶-底物复合物粘附在载体上，这就是“吸附”的含义。
WB (蛋白质印迹Western Blot)


先要进行SDS-PAGE，然后将分离开的蛋白质样品用电转仪转移到固相载体上，而后利用抗原-抗体-标记物显色来检测样品，可以用于定性和半定量。
对于IHC来说，定位是免疫组化最大的优势
该方法可在组织和细胞中进行抗原的准确定位，因而可同时对不同抗原在同一组织或细胞中进行定位观察，这样就可以进行形态与功能相结合的研究，相比于其他蛋白检测方法，免疫组化具有定位较直接准确、定性灵敏度高，是定位检测分析首选方法对病理学领域开展深入研究是十分有意义，尤其对于有些因子的转位研究十分有用。
WB与IHC技术相比，定量更加准确
当然WB也可定性和定位(通过提取膜蛋白或核蛋白、胞浆蛋白分别检测其中抗原含量，进而间接反映它们的定位)，但敏感性远远低于IHC。
ELISA与免疫组化技术相比，定量最准确，是分泌性蛋白检测首选方法之一。
尤其对于微定量分析多个样本非常有用，所用试剂和样品量很少，结果精确。IHC针对性比较强，而且一般是以组织或者细胞为样本，而ELISA一般是使用血清或者组织磨碎液。免疫组化可以快速检测样本中抗体的阳性或者阴性，一般不用于定量检测。




原文地址：https://zhuanlan.zhihu.com/p/357395300