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应该先从DNA提取流程分析:裂解—结合—清洗—洗脱四个步骤。以下以磁珠法为例进行说明。
1.裂解,样品裂解充分与否,对后续DNA提取的量有至关重要的影响,是想裂解不充分的样品,DNA未完全从粗样品中释放出来,后续无论如何提取,都很难得到满意的结果的。这一步的决定因素就是裂解的环境包括温度、操作、还有裂解体系、时间等等;
2.结合,DNA与磁珠的结合情况也决定了最后DNA的得量。那么结合步骤的影响因素就包括:结合buffer、磁珠载量、操作、结合环境、时间等等。其中最关键的是结合buffer与磁珠的匹配度,没有最好的磁珠,也没有最优的buffer,只有最适合的才是最好的。
3.清洗,这个步骤主要就是去除前面步骤引入的大量盐类,同时去除DNA携带的蛋白质等其他杂质。所以这里的清洗液一方面要保证清洗效果,另一方面又不能让DNA从磁珠上洗脱下来。
4.洗脱,这个步骤要保证洗脱液能够将DNA完整洗脱下来,并且能够段时间内保护核酸不降解。
当然全过程中实验操作方法也是其中一个影响因素。 |
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