一篇让你掌握细胞增殖的七种方法

莺歌燕舞

在科研中，小伙伴们经常需要检测细胞增殖情况，比如敲掉某个与细胞生长有关的基因以后，细胞是挂了还是增加了?又比如，要验证一种抗肿瘤药物的药效，怎么知道细胞存活量?小伙伴们，不必问师兄师姐了，史上最全的细胞增殖的检测方法，就在这里%21%21%21

01Brdu/EdU 检测法

5-溴脱氧尿嘧啶核苷 Brdu 是演艺圈大腕胸腺嘧啶的替身，替身代替大腕胸腺嘧啶出演危险的武打戏——合成 DNA，为了引人注目还要穿上特别耀眼的衣服——专一性抗体，然后替身曝光在媒体的镁光灯%28免疫荧光、流式细胞术检测%29下，狗仔队拍到替身，替身知道纸包不住火，就道出自己替大腕演过的武打戏%28合成 DNA 的量%29。






EdU 检测法：EdU%285-Ethynyl-2’- deoxyuridine%29是一种胸腺嘧啶核苷类似物，又是另一个替身 B 代替大腕胸腺嘧啶出演武打戏的戏码%28合成 DNA%29%21就是 EdU 能够在细胞增殖时期代替胸腺嘧啶%28T%29渗入正在复制的 DNA 分子中，通过基于 EdU 与 Apollo 荧光染料的特异性反应快速检测细胞 DNA 复制活性，适用于细胞增殖、细胞分化、生长与发育、DNA 修复、病毒复制、细胞标记示踪等方面的研究，尤其适合进行 siRNA、miRNA、小分子化合物及其他药物的筛选实验。

02MTT法/CCK-8







噻唑蓝%28分子式 C18H16N5SBr%29别名蓝小姐
在 MTT 检测中，细胞是死是活主要看线粒体内的脱氢酶有没活性，那怎么知道有没活性?这时蓝小姐就牺牲自己，为脱氢酶验明正身。如果线粒体内的脱氢酶有活性，他就能将黄色的蓝姑娘%28MTT%29分解成兰紫色的水不溶性的甲瓒，并沉积在细胞中，死细胞无此功能。然后二甲基亚砜%28DMSO%29能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在 490nm 波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT 结晶形成的量与细胞数和细胞活力成正比。






CCK-8 就是 MTT 的升级版， CCK-8 细胞活性检测试剂中含有 WST-8——一种类似于 MTT 的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以为线粒体内的脱氢酶验明正身，在脱氢酶作用下，还原生成橙黄色的甲瓒产物。细胞增殖越多越快，则颜色越深;细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。用酶联免疫检测仪在450nm 波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。

03CFSE检测法

羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂%28CFSE%29是一种可穿透细胞膜的荧光染料，可以不可逆地与细胞内的氨基结合偶联到细胞蛋白质上，是一种良好的细胞标记物。
CFSE 检测法原理：
CFSE 进入细胞后，可以不可逆地与细胞内的氨基结合偶联到细胞蛋白质上。当细胞分裂时，CFSE 标记荧光可平均分配至两个子代细胞中，因此其荧光强度是亲代细胞的一。在一个增殖的细胞群中，各连续代细胞的荧光强度呈对递减，利用流式细胞仪在 488nm 激发光和荧光检测通道可对其进行分析。







04核抗原Ki67染色法







缺席 G0 期成靶标
Ki-67 染色，研究人员可以评估处于细胞周期所有活跃期的总增殖细胞的百分比。科研人员可以借此观察药物或未知化合物的刺激效应或抗增殖效应。可用免疫组织化学技术或流式细胞术检测。

053H-TdR渗入法

胸腺嘧啶核苷%28TdR%29是 DNA 特有的碱基，也是 DNA 合成的必需物质。用同位素 3H 标记TdR 即 3H-TdR 作为 DNA 合成的前体能掺入 DNA 合成代谢过程，那之后的每一条新合成的DNA 双链像被安装了 GPS 定位器一样，都能被液体闪烁计数器检测到，通过测定细胞的放射性强度，可以反映细胞 DNA 的代谢及细胞增殖情况。
优点：3H-TdR 掺入法敏感性高，客观性强，重复性好。
缺点：需一定设备条件：液体闪烁计数器，这玩意不便宜，同时还存在放射性核素污染问题，真是伤钱包又伤身体。

06微型活细胞监测系统

传统的细胞学实验方法有很多，如以上这些方法，这些方法往往都是要特定时间点对细胞进行处理和分析。传统细胞实验方法皆为终点法实验，无法获知细胞完整的动态变化，并且细胞在成像过程中出现的任何扰动（例如，固定、失去环境控制）都可能引入不必要的和具有误导性的实验伪影。


还有最简单的一种就是直接计数法，利用计数板或者细胞计数仪直接得出细胞数目，然后进行比较，优点是方便快捷，当然也省钱省力，但是不适合样品数量多的情况，也不适合特定亚群。因此发展了微型活细胞监测系统。
微型活细胞监测系统体积较小，可放入培养箱内对活细胞进行长时间动态监测，采用10x或20x的物镜进行实时拍摄，利用AI智能分析系统快速、准确合成细胞动态视频，计算细胞汇合度、细胞数量，生成细胞生长曲线。广泛应用于肿瘤细胞迁移、神经细胞生长检测、干细胞分化、细胞毒理实验、卵细胞成熟监测、类器官生长监测等研究。

07实时无标记动态细胞分析系统

原文地址：https://zhuanlan.zhihu.com/p/16955574848