一篇让你掌握细胞增殖的七种方法

奋斗的小鸟

在科研中，小伙伴们经常需要检测细胞增殖情况，比如敲掉某个与细胞生长有关的基因以后，细胞是挂了还是增加了?又比如，要验证一种抗肿瘤药物的药效，怎么知道细胞存活量?小伙伴们，不必问师兄师姐了，史上最全的细胞增殖的检测方法，就在这里%21%21%21

01Brdu/EdU 检测法

5-溴脱氧尿嘧啶核苷 Brdu 是演艺圈大腕胸腺嘧啶的替身，替身代替大腕胸腺嘧啶出演危险的武打戏——合成 DNA，为了引人注目还要穿上特别耀眼的衣服——专一性抗体，然后替身曝光在媒体的镁光灯%28免疫荧光、流式细胞术检测%29下，狗仔队拍到替身，替身知道纸包不住火，就道出自己替大腕演过的武打戏%28合成 DNA 的量%29。






EdU 检测法：EdU%285-Ethynyl-2’- deoxyuridine%29是一种胸腺嘧啶核苷类似物，又是另一个替身 B 代替大腕胸腺嘧啶出演武打戏的戏码%28合成 DNA%29%21就是 EdU 能够在细胞增殖时期代替胸腺嘧啶%28T%29渗入正在复制的 DNA 分子中，通过基于 EdU 与 Apollo 荧光染料的特异性反应快速检测细胞 DNA 复制活性，适用于细胞增殖、细胞分化、生长与发育、DNA 修复、病毒复制、细胞标记示踪等方面的研究，尤其适合进行 siRNA、miRNA、小分子化合物及其他药物的筛选实验。

02MTT法/CCK-8







噻唑蓝%28分子式 C18H16N5SBr%29别名蓝小姐
在 MTT 检测中，细胞是死是活主要看线粒体内的脱氢酶有没活性，那怎么知道有没活性?这时蓝小姐就牺牲自己，为脱氢酶验明正身。如果线粒体内的脱氢酶有活性，他就能将黄色的蓝姑娘%28MTT%29分解成兰紫色的水不溶性的甲瓒，并沉积在细胞中，死细胞无此功能。然后二甲基亚砜%28DMSO%29能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在 490nm 波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT 结晶形成的量与细胞数和细胞活力成正比。






CCK-8 就是 MTT 的升级版， CCK-8 细胞活性检测试剂中含有 WST-8——一种类似于 MTT 的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以为线粒体内的脱氢酶验明正身，在脱氢酶作用下，还原生成橙黄色的甲瓒产物。细胞增殖越多越快，则颜色越深;细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。用酶联免疫检测仪在450nm 波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。

03CFSE检测法

羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂%28CFSE%29是一种可穿透细胞膜的荧光染料，可以不可逆地与细胞内的氨基结合偶联到细胞蛋白质上，是一种良好的细胞标记物。
CFSE 检测法原理：
CFSE 进入细胞后，可以不可逆地与细胞内的氨基结合偶联到细胞蛋白质上。当细胞分裂时，CFSE 标记荧光可平均分配至两个子代细胞中，因此其荧光强度是亲代细胞的一。在一个增殖的细胞群中，各连续代细胞的荧光强度呈对递减，利用流式细胞仪在 488nm 激发光和荧光检测通道可对其进行分析。







04核抗原Ki67染色法







缺席 G0 期成靶标
Ki-67 染色，研究人员可以评估处于细胞周期所有活跃期的总增殖细胞的百分比。科研人员可以借此观察药物或未知化合物的刺激效应或抗增殖效应。可用免疫组织化学技术或流式细胞术检测。

053H-TdR渗入法

胸腺嘧啶核苷%28TdR%29是 DNA 特有的碱基，也是 DNA 合成的必需物质。用同位素 3H 标记TdR 即 3H-TdR 作为 DNA 合成的前体能掺入 DNA 合成代谢过程，那之后的每一条新合成的DNA 双链像被安装了 GPS 定位器一样，都能被液体闪烁计数器检测到，通过测定细胞的放射性强度，可以反映细胞 DNA 的代谢及细胞增殖情况。
优点：3H-TdR 掺入法敏感性高，客观性强，重复性好。
缺点：需一定设备条件：液体闪烁计数器，这玩意不便宜，同时还存在放射性核素污染问题，真是伤钱包又伤身体。

06微型活细胞监测系统

传统的细胞学实验方法有很多，如以上这些方法，这些方法往往都是要特定时间点对细胞进行处理和分析。传统细胞实验方法皆为终点法实验，无法获知细胞完整的动态变化，并且细胞在成像过程中出现的任何扰动（例如，固定、失去环境控制）都可能引入不必要的和具有误导性的实验伪影。


还有最简单的一种就是直接计数法，利用计数板或者细胞计数仪直接得出细胞数目，然后进行比较，优点是方便快捷，当然也省钱省力，但是不适合样品数量多的情况，也不适合特定亚群。因此发展了微型活细胞监测系统。
微型活细胞监测系统体积较小，可放入培养箱内对活细胞进行长时间动态监测，采用10x或20x的物镜进行实时拍摄，利用AI智能分析系统快速、准确合成细胞动态视频，计算细胞汇合度、细胞数量，生成细胞生长曲线。广泛应用于肿瘤细胞迁移、神经细胞生长检测、干细胞分化、细胞毒理实验、卵细胞成熟监测、类器官生长监测等研究。

07实时无标记动态细胞分析系统

实时无标记动态细胞分析技术%28RTCA, Real Time CelI AnaIysis%29是安捷伦用于活细胞分析的创新型核心技术，该技术采用特殊工艺，将微电极列阵整合在细胞培养板的每个细胞生长孔底部，用以构建实时、动态、定量跟踪细胞形态和增殖分化改变的细胞阻抗检测传感系统。

当贴壁生长在微电极表面的细胞引起贴壁电极界面阻抗的改变时，这种改变与细胞的实时功能状态改变呈相关性，通过实时动态的电极阻抗检测可以获得细胞生理功能相关的生物信息、包括细胞生长、伸展、形态变化、死亡和贴壁等。



本文来源于药研课堂

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