ImageJ实用技巧——荧光&明场图片合并和分割(基本功能篇)

空白派

拍免疫荧光或者荧光转染的时候，一定会遇到不同颜色荧光照片合并与分割，以及荧光和明场照片的合并问题。


虽然大部分情况下，拍照软件会完成这一工作，但如果想对某一颜色的图片进行修改，然后再合并，或者提取某一个通道的照片，这时候就需要ImageJ了。
ImageJ中的这一功能较为基础，不需要插件，作为基础功能篇的第一篇，主要介绍怎么利用ImageJ对荧光照片合并、分割，以及荧光与明场之间合并。

一、不同荧光照片合并、分割
（1）合并
1、打开待合并的图像



三张不同颜色的荧光图像

2、合并不同颜色通道（Image-Color-Merge Channels）
弹出Merge Channels界面：


总共有7个颜色通道，每个颜色选择对应的照片，点击OK。出现合并后的图像（Composite）。
但这时候的合并图像只是三个8-bit的Stacks，如果要保存的话需要把图像转换为RGB模式。



左右调节工具条，发现左上角的颜色信息会变，但是图片依然是合并后图像

Tips：如果想要更改某一颜色通道，可以使用Channels Tool（Image-Color-Channels Tool），选择不同通道后，对单一通道进行修改，不影响其他通道。



选择不同Channel，可以呈现不同颜色

3、生成RGB的合并图像（Image-Color-Stack to RGB）
生成一张命名为Composite的RGB图像：



命名为Composite的RGB图像

注意：这里一定要Stack to RGB，否则保存后的图片并不是Merge后的状态。

4、保存图片（File-Save）
<hr/>（2）分割
1、打开一张RGB图像



2、将RGB图像转换为Composite图像（Image-Color-Make Composite）


这时候三种颜色通道都已经分离出来了。这一步是为了后面能直接分割出三个带有伪彩的通道。如果直接Split Channels，也会得到三个通道，但是没有伪彩。

（3）分离不同颜色通道的图片（Image-Color-Split Channels）



（4）分别保存图像（File-Save）
<hr/>二、荧光与明场之间合并
做siRNA、慢病毒等转染实验时，需要统计细胞的转染效率。同一视野下，分别拍摄荧光和明场的照片，这时候就需要将荧光和明场照片合并，易于计算带有荧光标记的细胞。
1、打开荧光和明场图像



2、合并不同颜色通道（Image-Color-Merge Channels）
与荧光照片合并的唯一不同是：明场照片选择gray通道：




Tips：如果荧光较弱，可以单独对荧光照片增加亮度和对比度（Image -> Adjust -> Brightness/Contrast）。
3、生成RGB的合并图像（Image-Color-Stack to RGB）
4、保存图片（File-Save）
<hr/>如果对于ImageJ使用有什么问题可以私信我，或者给我发邮件：zhaoyc9@163.com
更多教程可以关注我的专栏：
希望对大家有帮助~
猪年快乐(๑˙ー˙๑)

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