一文带你了解免疫组化（IHC）和原位杂交技术（ISH）在癌症中的不同应用

临床医师

免疫组化

免疫组织化学（IHC）是一种非常有价值的工具，用于检测、定位和量化保存组织中的抗原，以达到研究和诊断的目的。这种方法因其方便、可靠和多功能性而被广泛用于诊断和研究。在IHC中，抗原抗体复合物可通过荧光检测显现出来。不过，它们通常是通过光显微镜来观察的，而不是使用颜色信号，这种方法被称为显色检测。与免疫荧光技术相比，显色IHC的优势在于通过苏木精复染，特异抗原周围的组织形态清晰可见。染色IHC标记的结果以半定量方式报告，具有重要的诊断和预后意义，特别是在区分良性和恶性病变方面。



图1. 小鼠抗CD44抗体（克隆号SFF-304）和兔抗Ki-67抗体（克隆号MIB-1）与MULTIVIEW® PLUS（mouse-HRP/rabbit-AP）试剂盒（ENZ-KIT181-0150，Enzo Life）配合使用，进行多重免疫组化染色，苏木精用作复染剂。

原位杂交

原位杂交（ISH）是一种独特的分子分析方法，因为它能在显微镜下精确定位中期染色体涂片、细胞和组织中的DNA、mRNA和microRNA等核酸。1969年8月，两个独立的研究小组首次对该方法进行了描述。原则上，ISH包括：(a)细胞或组织样本的固定和预处理，以最佳方式保存目标核酸；(b)标记探针通过互补碱基配对与目标杂交；最后，(c)检测标记，以便在显微镜下观察杂交。与IHC相似，探针的检测可通过显色或荧光技术实现，分别称为显色原位杂交（ISH）或荧光原位杂交（FISH）。FISH已成为对可能最终导致癌症发生的基因畸变进行分子分析的一种特别强大的工具。



图2. Nick Translation DNA Labeling System 2.0（ENZ-GEN111-0050，Enzo Life）用Orange 552 dUTP（ENZ-42842，Enzo Life）标记TP53的BAC DNA 探针，用Green 496 dUTP（ENZ-42831，Enzo Life）标记中心粒17的BAC DNA 探针。标记的探针与中期染色体涂片杂交。(图片来源于卢兹肿瘤大学研究所）

IHC在癌症中的应用

IHC 是一种利用单克隆和多克隆抗体检测组织切片中特定抗原的方法，是癌症研究人员和外科病理诊断医师的一个非常强大的工具。通过IHC，可以确定相关抗原在健康和疾病状态下的组织分布。IHC被广泛应用于癌症研究和诊断，因为特定的肿瘤抗原只有在某些癌症类型中才会重新表达或上调。因此，IHC在研究和病理学中发挥着重要作用，尤其是在肿瘤病理学、神经病理学和血液病理学等亚专业领域。虽然组织的基本组织学检查仍被认为是有用和必要的步骤，但IHC能提供更多更详细的见解。IHC可用于癌症研究中的各种应用，如肿瘤标志物的鉴定和监测、肿瘤诊断（尤其是来源不明的肿瘤）、肿瘤预后以及预测乳腺癌和前列腺癌的治疗反应。



图3. 宫颈组织先用抗Ki-67抗体（小鼠）染色，然后用生物素偶联的抗小鼠二抗染色，再用SAVIEW® PLUS HRP Reagent（ENZ-ACC102-0150，Enzo Life） 染色。

ISH在癌症中的应用

FISH是一种功能强大的技术，主要用于检测染色体异常。FISH的灵敏度高、特异性强、检测速度快，使其成为一项举足轻重的细胞遗传学技术，在血液恶性肿瘤和实体瘤的研究和诊断方面都取得了重大进展。从医学角度看，FISH可用于检测基因畸变，如基因融合、非整倍体或染色体缺失。它还可用于监测畸变的进展或鉴定新的致癌基因。现在，病毒感染在某些癌症类型的发展中的重要性已被广泛证实，ISH也为人类乳头瘤病毒（HPV）感染相关癌症的诊断和研究提供了一个强大的工具。Enzo Life于1986年开发出第一款用于ISH检测的非放射性HPV探针，可用于监测细胞和组织样本中病毒载量。



图4. 用PATHO-GENE® HPV 16/18/31/33/51（ENZ-32882，Enzo Life）筛查宫颈组织，然后用SAVIEW® PLUS HRP Reagent（ENZ-ACC102-0150，Enzo Life）进行筛查。

EnzoLife提供多样的HPV病毒、经典的肿瘤靶点（EGFR）、GADPH以及泛素化等Ready-to-use型的RNA原位杂交探针。
除此之外，如果没有找到合适的商品化RNA探针，也可以对想要检测到靶点自行定制特异性的RNA探针（如图5）。



图5. 原位杂交探针的定制

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