细菌的接种与培养

空白派

实验三 细菌的接种与培养技术
一、实验目的：
1.掌握各种培养基的接种方法。
2、熟悉细菌在不同培养基中的生长现象及结果记录。
二、实验材料：
生物安全柜、恒温培养箱、酒精灯、营养琼脂平板、血液琼脂平板、肉汤管半固体培养基、克氏双糖铁琼脂高层斜面、接种环、接种针、标签纸、记号笔、菌种标本等。
三、实验方法与步骤：
1.分区划线法（普通平皿培养基）
①对接种环灭菌处理后用环取标本，将其均匀涂布于平板表面边缘一小部分，约占培养基面积的1/5（第一区）
②烧灼接种环，转动平回至适合操作的位置（约60°），将环通过第一区2-3次取菌，划出第二区并连续划线，线与线之间不重叠，第二区约占培养基面积的1/4
③烧灼接种环，接上述方法依次划3、4区
2、液体培养基接种法（肉汤培养基）
①用接种环或接种针挑取单个菌落（接种环或接种针需先灼烧灭菌）
②用右手小指和手掌小鱼际肌侧拔下试管塞，并立即火焰烧灼试管口灭菌
③倾斜液体培养管，将冷却后的接种环或接种针伸入试管，在管壁与液面交界上约5mm处研磨接种物（以试管直立后液体淹没接种物为佳）
3、穿刺接种法（半固体培养基）
①用灭菌后的接种针挑取菌落，用小鱼际肌拔下试管塞，烧灼试管口灭菌
②由培养基中央垂直刺入至距管底约2-3mm处，再沿穿刺线退出接种针
③再次灭菌试管口，盖好试管塞，放回原处
4、高层斜面接种法（克氏双糖唐铁琼脂培养基）
①用灭菌后的接种针挑取待鉴定细菌的菌落，小鱼际肌拔下试管塞，烧灼试管口
②将接种针插入斜面正中，直刺入底部至距离管底2~3mm处，再沿线退出接种针
③沿斜面的长轴划一条线，而后在斜面由下至上连续划线接种（做“S”形划线）
④再次灭菌试管口，盖好试管塞，放回原处
5、将上述4个接种完成的培养基置于恒温培养箱内培养18-24h，观察细菌生长情况
三、实验分析
1、严格无菌操作，注意生物安全
2、平板应倒置于桌面，划线时需由大拇指控制开盖角度，防止空气中细菌沉降于培养基表面
3、接种环灭菌后需先于琼脂无菌区域冷却后再取菌
4、平板上的划线要尽量做到密、直匀，接种环与平板表面的角度要尽量小，以免划破培养基
5.接种液体培养基时尽量不要摇动或搅动培养基，以免产生气溶胶
6.穿刺接种时，要垂直于培养基表面直线穿刺，不能穿刺至试管底部，不能抖动，需沿原路线退出
补充：四、细菌的生长现象（2023.9.22）
(一)液体培养基：混浊，有沉淀。
(二)半固体培养基：细菌沿穿刺线呈明显的线性生长，穿刺线两边的培养基仍然澄清透明，表现为动力试验阴性。
(三)固体培养基：菌落表面光滑、湿润、边缘整齐，判断为S型菌落。
(四)KIA：底层黄色，琼脂裂开且被顶起，试管底部形成空白段，斜面为红色。

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