技术丨LAMP、RPA、PCR 哪家强？

病理医师

新冠疫情使得“核酸检测”家喻户晓，PCR检测作为金标准承担了无限重任。然而由于PCR是变温过程，对实验环境、仪器设备等有严格要求，具有一定的局限性，偏远地区、县级医院开展核酸检测非常不方便。等温扩增技术由于其扩增期间反应条件温和、不需要特殊的仪器设备，能真正意义上实现分子POCT而更受瞩目。
主流核酸检测技术比较

等温扩增技术多种多样，其所用酶的多样性，决定了等温扩增原理的千差万别。LAMP和RPA是目前应用最为广泛的两种等温扩增技术，商业化程度也是最高的。今天我们就来对LAMP、RPA、PCR技术做一个清晰的比较。



主流核酸检测技术的原理

• PCR技术原理图
  

• LAMP技术原理图
  

环介导等温扩增(LAMP)是Notomi等于2000年首先提出来的一种新的核酸扩增技术，是利用多引物在60-65℃高温下进行单酶介导的指数扩增，在扩增产物上，以大小不一、成环双链DNA为主。

• RPA技术原理图
  

RPA,即重组酶聚合酶扩增技术，是在由多种酶和蛋白的参与下，在恒温条件下实现核酸指数扩增的技术，被称为是可以替代PCR的核酸检测技术。
RPA的反应过程，首先是重组酶与引物结合，形成蛋白-DNA复合物。接着在dsDNA中寻找同源序列。一旦引物定位了同源序列，就会发生链交换反应形成并启动DNA合成，对模板上的目标区域进行指数式扩增。而被替换的DNA链与SSB（单链DNA结合蛋白）结合，防止进一步被替换。在这个体系中，由两个相对的引物起始一个合成事件。整个过程进行得非常快，一般可在十分钟之内获得可检出水平的扩增产物。

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