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关于染色体构象捕获技术原理?
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雷达卡
发表于 2024-12-16 20:55
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对于3C 技术中无法理解为什么用到PCR,这里PCR扩增的是什么?如何理解PCR在这里的运用?
原文地址:https://www.zhihu.com/question/46367145
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发表于 2024-12-16 20:55
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PCR扩增的是抓下来的有相互作用的序列,有公共接头的话可以作为建库的一步。这一步扩增是个倍增放大器,要把信号放大到测序可以测出来的地步。同时,放大的保真性要求很高,普通Taq酶是不推荐的。不过,本身PCR就可以玩出花来,你也可以针对感兴趣的方向玩一玩技术。
祝开心。
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雷达卡
发表于 2024-12-16 20:56
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我认真读了几次问题的描述,还是看不懂你想问什么。3C不用PCR检测用什么?两个ligate到一起的target sequence自己发光吗?那你可以用FISH或者尝试用两种依赖不同PAM的cas9荧光标记两处DNA序列实时定位interaction变化(我就是说说,这想法坑我了几个月:p)
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雷达卡
发表于 2024-12-16 20:57
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实际操作中,交联和连接效率都很低,投入上千万的细胞也只能抓到一点点DNA,不足以直接分析,材料成本也不允许,要靠PCR扩增一下信号。
另外在一些应用中会涉及到环状DNA,需要PCR转成线性的方便测序。
但是PCR也会放大信号噪音,所以PCR的循环数是要优化一下的
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