染色体荧光原位杂交分析有了解的吗？谢谢。

空白派

我母亲71岁，前几天因肠黏连导致小肠内疝，引起肠梗阻，后住院行腹腔镜手术，将连黏处松解，并未切除肠管。出院时发现有染色体荧光原位杂交分析6次，一共1200元，需全部自费，请问下：这种分析是干什么的？肠梗阻需要测这个吗？谢谢
原文地址：https://www.zhihu.com/question/49494761

感恩由您

概述

在类器官的培养过程中，如果我们想了解类器官的增殖及凋亡状态，可以通过对活细胞和死细胞进行荧光染色，通过荧光显微镜拍照观察。
Calcein-AM是一种对活细胞进行荧光标记的细胞染色试剂，发绿色荧光 (Ex=490nm, Em=515nm)。因其在传统的Calcein（钙黄绿素）基础上引入乙酰甲氧基甲酯(AM)基团，增加了疏水性，使其能够轻易穿透活细胞膜。一旦进入细胞后，Calcein-AM（本身不发荧光）被细胞内的酯酶剪切形成膜非渗透性的极性分子Calcein，从而被滞留在细胞内并发出强绿色荧光。与其它同类试剂（如BCECF-AM和CFDA)相比，由于Calcein-AM细胞毒性极低，是最适合用于活细胞染色的荧光探针，而且不会抑制任何的细胞功能，如增殖和淋巴球的趋化性。        
由于死细胞缺乏酯酶，Calcein-AM仅用于对活细胞的细胞生存能力测试和短期标记。因此，Calcein-AM常常与死细胞荧光探针如碘化丙啶(PI)等联合使用，同时进行活细胞和死细胞的荧光双重染色。碘化丙啶(Propidium iodide, PI)不能穿过活细胞的细胞膜，仅能穿过死细胞膜的无序区域而到达细胞核，并嵌入细胞的DNA双螺旋从而产生红色荧光(Ex=535nm, Em=617nm)，因此PI仅对死细胞染色。由于Calcein和PI-DNA都可被490nm激发，因此可用荧光显微镜同时观察活细胞和死细胞。而用545nm激发，仅可观察到死细胞。
原理

本试剂盒的工作原理就在于Calcein-AM和PI的双重染料，来进行活细胞和死细胞的双重染色标记，从而进行活细胞和死细胞水平的分析。根据我司优化的实验体系，以24孔板，每孔25uL类器官基质胶凝聚物为例，每孔添加500uL染色工作液进行染色。

活细胞/死细胞双染试剂盒(abs50056)

组分	名称	规格	保存
A	Calcein-AM Solution(2mM)	50μL	-20℃避光干燥保存
B	PI Solution(1.5mM）	150μL	-20℃避光干燥保存
C	10×Assay Buffer	50mL	-20℃保存，经常使用可放在4℃保存。

实验步骤

一、工作液的配制：

1、1×Assay Buffer（反应缓冲液）的配制 从低温冰箱内取出10×Assay Buffer，根据单次用量无菌条件取出适量，用去离子水(dH2O)做10倍稀释以得到1×Assay Buffer。
2、1×染色工作液的配制
（1）先将低温保存的Calcein-AM溶液(2mM)和PI溶液(1.5mM)回到室温20-30min。 注意：第一次使用可对母液进行分装，以减少反复冻融次数。
（2）取5μL Calcein-AM溶液(2mM)和15μL PI 溶液(1.5mM)加入5mL 1×Assay Buffer，充分混匀。此时得到Calcein-AM的工作液浓度为2μM，PI的工作液浓度为4.5μM。
注意：由于不同种类器官的最佳染色条件不同，初次实验建议做梯度实验，以确定Calcein-AM和PI的最适浓度。梯度筛选的原则为使用最低的探针浓度得到最好的荧光结果。可以使用以下方法来优化得到两种荧光染料的最佳工作浓度。

a. 用0.1%皂素或者0.1-0.5%地高辛孵育类器官1h，或者用70%乙醇孵育类器官1h，从而制备死类器官；
b. 用0.1-10μM的PI溶液进行死类器官染色，以得到仅仅对细胞核染色，而不会对细胞质染色的最佳工作浓度；
c. 用0.1-10μM的Calcein-AM进行死类器官染色，以得到不会对细胞质染色的最佳工作浓度。然后用此浓度进行活细胞染色，去观察活细胞是否能被染色。
二、染色步骤：

以24孔板，每孔25uL类器官基质胶凝聚物为例，检测时只需弃除类器官培养液，保留孔板内25μL类器官基质胶凝聚物，加入染色工作液即可。
1、将类器官培养基吸弃，加入PBS清洗2-3遍，以充分去除残留的酯酶活性，然后弃除PBS；
2、每孔加入500μL染色工作液，混匀，37℃孵育1h；
3、荧光显微镜下使用490±10nm激发滤片同时检测活细胞（黄绿色荧光）以及死细胞（红色荧光）。另外，使用545nm的发射滤片仅能观察到死细胞。也可以直接在荧光酶标仪下使用合适的滤片进行检测。
注意事项
1、由于Calcein-AM对湿度非常敏感，若是Calcein-AM溶液每次取完需要量后，必须紧紧密封盖子。建议根据单次用量，分装密封保存。
2、由于Calcein-AM的稳定性比较差，此染色工作液必须现配现用，并且在当天用完。
3、碘化丙啶(PI)有一定的致癌性，操作时一定要注意防护。若接触到皮肤，需要立即用自来水清洗。
4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
染色效果图展示

一、人肝细胞癌类器官明场图









人肝细胞癌类器官扩增过程（由少到多）

二、人肝细胞癌类器官活死染色视频


https://www.zhihu.com/video/1768633868541026304
三、人肝细胞癌类器官活死染色图





人肝细胞癌类器官活细胞、死细胞、活死细胞染色合并图



人肝细胞癌类器官活死细胞染色合并图

今天讲解就到这了，大家如有实验问题，欢迎一起交流哦！

类器官培养产品推荐

货号	品名	规格
abs50056	活细胞/死细胞双染试剂盒	500T
abs9495	基质胶（低因子、无酚红）	1.5mL×4
abs9786	Organotial人肝胆管癌类器官培养试剂盒	1kit
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abs9858	Organotial人喉癌类器官培养试剂盒	1kit

同花顺

FISH：采用了已知序列的、特异性的单链核酸作为探针，标记了生物素或荧光素，在一定的温度和离子浓度下通过碱基互补配对法则，使得DNA-DNA原位杂交，采用荧光法显示，最终将DNA在细胞爬片、组织切片(石蜡切片or冰冻切片)的原始位置上标记出来的一种技术。
荧光原位杂交（FISH）
试剂和设备

• 20X 柠檬酸钠缓冲液（SSC：3 M NaCl，0.3 M柠檬酸钠，pH 7，货号S6639）
  
• RNase A（货号R4642）100 µg/mL，2x SSC溶液
  
• 胃蛋白酶（货号P6887） 40单位/ml，10 mM HCl溶液
  
• 多聚甲醛，EM级（货号P6148），现制，4% w/v水溶液
  
• 乙醇
  
• 标记的探针。通过缺口平移随机引物或 A3803聚合酶链反应（如ADVANCE™缺口平移试剂盒）而对质粒DNA进行生物素-11-dUTP标记
  
• 杂交混合液：50％甲酰胺（货号F7508）、10％硫酸葡聚糖（货号D8906）、0.1％ SDS（货号L4390）、0.5-1.5 ng/µl标记的探针和300 ng/mL鲑鱼精子DNA（货号D7656），2x SSC溶液
  
• 洗涤缓冲液：20％甲酰胺（货号F7508），0.1x SSC溶液
  
• 检测缓冲液：0.2% Tween 20（货号. P1379），4x SSC溶液
  
• 封闭缓冲液：5% 牛白蛋白（货号A3803），检测缓冲液溶液
  
• 抗体或检测化合物（如链霉亲和素-Cy3，货号S6402），封闭缓冲液溶液
  
• DAPI（货号D9542），2 µg抗荧光淬灭封片剂溶液。
  
• 荧光显微镜、滤光片和可选的三带通滤波器（x58，Omega Optics）
  
• 玻片（货号S8400）
  
• 用于孵育和杂交步骤的塑料盖玻片（从可高压灭菌的垃圾袋切下，如货号B4408）
  
• 热模块/ 改进的热循环仪
  
• 用于洗涤步骤的科普林缸（货号S6016、S5641或S5891）
  

操作流程
玻片制备
杂交
检测
玻片制备

• 从任何细胞类型开始染色体制备。（Z-Series Pumps）
  
• 在37 °C下用200 µL RNase孵育1小时
  
• 在2x SSC中洗涤玻片5分钟。重复。
  
• 在10 mM HCl中漂洗玻片。
  
• 在37 °C下用200 µL胃蛋白酶孵育10分钟。
  
• 在去离子H2O中漂洗玻片。
  
• 在2x SSC中洗涤玻片5分钟。重复。
  
• 在多聚甲醛中固定玻片10分钟。
  
• 在2x SSC中洗涤玻片5分钟。重复。
  
• 在梯度乙醇中对玻片进行脱水：70%、80%、95%；每种2分钟。
  
• 风干。
  

杂交

• 每块玻片制备30 µl杂交溶液。加热至70 °C，维持10分钟后置于冰上。（Z-Series Pumps）
  
• 每块玻片上加入30 µl杂交溶液并盖上塑料盖玻片。（Z-Series Pumps）
  
• 在热模块上65-70 °C条件下对玻片进行变性5分钟。
  
• 逐渐降温至37 °C。
  
• 在湿度箱37 °C条件下杂交过夜。
  

检测

• 在2x SSC中洗涤玻片以去除盖玻片。
  
• 在洗涤缓冲液中40 °C条件下洗涤玻片5分钟。重复。
  
• 在0.1x SSC中40 °C条件下洗涤玻片5-15分钟。
  
• 在2x SSC中40 °C条件下洗涤玻片5-15分钟。
  
• 将玻片冷却至室温。
  
• 在检测缓冲液中平衡玻片5分钟。
  
• 在封闭缓冲液中封闭20-30分钟。
  
• 用50 µl 抗体或检测化合物孵育30-60分钟（如在封闭缓冲液中的5 µg/ml 链霉亲和素-Cy3）。
  
• 在2x SSC中洗涤玻片5分钟。重复两次。
  
• 用DAPI溶液复染10分钟。
  
• 简短漂洗后在抗荧光淬灭封片剂中进行封片。
  
• 用荧光显微镜进行分析。
  

感恩由您

一般都是检查癌症相关基因或染色体的，有些癌症会有相关基因或染色体的改变，可以通过此技术来检查，辅助诊断。

卡卡

蟹蟹邀请。。
白菜医学生，不过知道这个是Fish技术，肿瘤遗传学内容，用于测定病人染色体，作为检测癌症技术手段。
为什么清除肠粘连要做这个，可能是为了排除癌症可能性。。我是猜的(｡･ω･)
毕竟不临床不清楚，求真正的专科大神不吝赐教
题主是觉得有点过检查了吧，还没法回答这个呢。。