细胞器常用蛋白Marker全攻略（下）

奋斗的小鸟

上期小优跟大家介绍了一部分特别常用的细胞器marker [细胞器常用蛋白marker全攻略（上）]，这次咱们再来看看剩下的一些常用的和一些特殊结构的蛋白marker，包括现在研究火热的外泌体、自噬小体这些蛋白marker，需要的小伙伴看过来喽！
1. 细胞骨架 Cytoskeleton
常用marker：actin（α/β）; Tubulin（α/β）； Keratin; Vimentin
细胞骨架包括微丝、微管和中间纤维，在细胞分裂、细胞生长、细胞物质运输、细胞迁移等等许多生命活动中都具有非常重要的作用。一般情况染细胞骨架是染微管或微丝。

微管是由微管蛋白组成的细长丝状物。α-微管蛋白和β-微管蛋白是分子量为55 kDa且可以形成异源二聚体的球形蛋白。它们可以聚合形成圆柱状的微管。所以，针对α-或β-微管蛋白（Tubulin）的抗体都是微管的良好标记物。

与微管类似，微丝是由α-或β-肌动蛋白（actin）形成的双螺旋细圆柱管。它们的动态聚合与解聚周期调节着细胞运动、细胞极化和细胞支撑。此外，一些肌动蛋白结合蛋白控制着肌动蛋白的聚合。
2. 核糖体 Ribosomes
常用marker：Ribosomal Protein S3; Ribosomal Protein L7a; S6 RibosomalProtein；Ribosomal Protein L26; Ribosomal ProteinS10; Ribosomal Protein S11核糖体是细胞内一种核糖核蛋白颗粒，主要由RNA(rRNA）和蛋白质构成，其惟一功能是按照mRNA的指令将氨基酸合成蛋白质多肽链，是细胞内蛋白质合成的分子机器。所以我们一般用组成核糖体的蛋白质S3、S6、S10、S11和L2、L7等来作为其marker。
3. 中心体 Centrosomes
常用marker：PCM-1、γ- Tubulin、Pericentrin、Ninein
抗γ-微管蛋白抗体可以指示中心体。其它的中心体标记物还有中心粒旁体蛋白和Ninein。中心粒旁体蛋白是参与微管初始形成（成核）且分子量为220 kDa的蛋白。Ninein是参与微管成核及正端和负端加帽的中心体蛋白。
4. 一些特殊结构
a. 自噬小体 Autophagosomes：
常用marker：Atg12; LC3a; LC3b; SQSTM1/p62;
自噬体一般采用自噬体形成前期的Atg12以及自噬膜延长期自噬体是由小的膜结构——自噬体前体，拉伸后围绕在损伤的细胞器周围形成的双层膜所构成的胞内细胞器。之后自噬体会与溶酶体融合形成自噬溶酶体以准备降解。

Atg12和Atg5是共价相连的，并作为一个单位行使功能。，Atg12-Atg5结合物在延长过程中位于自噬体膜上。因此它是自噬过程起始的一个良好标志物。一些其它的Atg亚型调节自噬体形成及与溶酶体的融合，也能用作自噬体的标记物。

LC3在自噬发生后，由于LC3-II 在自噬中通过酯化修饰共价连接了PE 并定位于自噬泡，会导致LC3 在自噬前后发生定位的变化：即不发生自噬的细胞中，LC3-I 定位于胞浆并呈弥散状分布，无特异的细胞器定位信号；而发生自噬的细胞中，与磷脂酰乙醇胺（PE）结合的LC3-II 组分会定位于自噬泡，呈斑点状（puncta）分布，代表自噬泡的位置

P62介导泛素化蛋白通过自噬体的降解，与LC3 相互作用，所以也可作为自噬体的marker。



上图为LC3A/B (D3U4C) XP®Rabbit mAb #12741（绿色），Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate)#8046（红色），DRAQ5® #4084 进行核标记（DNA 荧光染料，蓝色伪彩）

b. 内涵体 Endosomes：
常用marker：Rab5; Rab7;Rab9; Rab11；EEA1; Caveolin-1/2; Clathrin Heavy Chain;

内涵体是将分子包裹住以后将其从膜上转移至细胞其它部位的膜泡小体。通常，内吞的复合物（例如受体-配体）被分配到早期内涵体中，而每种成分就可以通过晚期内涵体转运到新的位点（例如溶酶体、高尔基体等）。

Rab5是Ras家族中的一种小GTP酶（24 kDa）。它从质膜穿梭至早期内涵体并通过与其它蛋白质的相互作用来调节膜泡运输及质膜与早期内涵体的融合。类似地，Rab7、Rab9和Rab11都是很好的内涵体蛋白标记物。

而早期内体抗原1（EEA1）是一种与Rab5相互作用的蛋白。它是一种分子量为162 kDa的蛋白并参与内涵体运输。所以也是内涵体的常用marker。

c. 外泌体 Exosomes：
常用marker：HSPA8；CD81；CD9

有时候内涵体会与质膜融合并被分泌到胞外环境中，从而形成一种分泌机制。由于外泌体含有一些可作为特定疾病潜在标志物的胞质蛋白、膜蛋白以及脂类和RNA分子，也可进行信息的传递，因此十分重要。

HSPA8以及四跨膜蛋白CD81和CD9都是外泌体的良好标志物。

d. 过氧化物酶体 peroxisomes：
常用marker：Fox2p；Fox5p；Catalase; Peroxins ; 酰基辅酶A硫酯酶8
过氧化物酶体是进行诸如脂肪酸β-氧化等氧化反应及预防过氧化物的结构。Fox2p和Fox5p是过氧化物酶体的膜受体。

过氧化氢酶(Catalase)是一种保护细胞免受过氧化氢毒性的过氧化物酶体蛋白。

酰基辅酶A硫酯酶8属于一组催化酰基辅酶A水解成自由脂肪酸及辅酶A（CoASH）的酶，能够调节胞内酰基辅酶A、自由脂肪酸和CoASH的水平。
过氧化物酶体生成蛋白（由24种基因组成的一类蛋白）是过氧化物酶体形成中不可分割的一部分。这些都可作为其marker。

e. 蛋白酶体proteasomes：
常用marker：Scl1；Cim5；Rpn2；Pre-6；26S；20S

蛋白酶体是多蛋白复合物，其功能是通过蛋白水解来降解蛋白。每个蛋白酶体由四个堆在一起的环形成一个中央孔，即核心。蛋白水解酶中一个由七个蛋白（β亚基）构成的复合物形成了内部的两个环，而七个α亚基形成了蛋白进入并达到核心的入口。

蛋白酶体中的20S蛋白酶体亚基、26S蛋白酶体亚基、α7和Rpn2，Pre-6、Cim5和Scl1 都是常用的蛋白酶体标记物。

除上述细胞器或一些特殊细胞结构外，有时候大家可能也需要染细胞间粘附（Intercellular Junctions）的表达状况，来分析肿瘤的迁移状态。

这种情况使用最多的是Cadherin家族，最常用的有E-Cadherin ，P-Cadherin， VE-Cadherin，N- Cadherin。E-Cadherin ：主要表达在上皮组织；N-Cadherin :主要表达于神经组织、横纹肌、心肌；P-Cadherin主要表达于胎盘、间皮组织、上皮细胞；VE-Cadherin主要表达于内皮细胞，影响血管的通透性和肿瘤血管的生成。

细胞器蛋白marker就介绍到这里啦，大家有什么问题可以留言哦！小优会尽量为您解答。

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