【操作篇】荧光共定位的定量分析！

莺歌燕舞

荧光共定位是很常见的实验方法，一般用来验证2种或3种蛋白是否存在共定位关系。在常规Protocol的指导下进行实验操作，很容易得到双荧光或多重荧光染色图像。



这种图像，一般由红色通道（代表蛋白A）和绿色通道（代表蛋白B）两种图像merge后得到。


                                                     （红色通道：蛋白A）


                                                   （绿色通道：蛋白B）
仅仅通过肉眼和语言描述是很难说清楚蛋白A和蛋白B的共定位程度到底如何。因此，我们需要对这种共定位关系进行定量分析。
今天的文章主要从操作上做出说明，之后将会从测量原理、分析、后期组图上系统地说明。
<hr/>图文步骤
1. 请出老朋友Image Pro Plus，并打开一张共定位图像。



2. 点击Measure，选择Co-localization。



3. 因为是红绿通道，因此在弹窗中按照如下选项进行设置，然后点击Forward。



4.点完后，我们会得到一张图像。
（这是红色通道-绿色通道性形成的散点图，可以看出散点几乎都落在对角线上，说明红绿通道相关性极强，且红绿通道荧光强度基本相当。）



5. 接着再次按照如下设置勾选，然后点击Forward。



6. 然后我们会得到如下参数。
（数据是基于以上散点图进行回归分析，得到的皮尔逊相关系数为0.919032，重叠系数R为0.932092，接近1，说明红绿通道散点相关性极强！）



7.总结一下，操作后我们得到红绿通道散点图、皮尔逊相关系数以及重叠系数，这三个要素是报告荧光共定位分析的最重要的数据，必须在论文中报告。
下期预告：测量原理和分析

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