一文详解：MET扩增如何检测？FISH检测和NGS检测有什么异同？

病理医师

MET扩增是非小细胞肺癌（NSCLC）靶向治疗中发生率较高的一种耐药机制。在EGFR敏感突变、KRAS G12C突变、ALK融合、ROS1融合和RET融合阳性非小细胞肺癌患者中，约15%的患者在接受对应靶向治疗后会出现MET扩增这一获得性耐药因素。除了治疗后出现的耐药外，原发性MET扩增的发生率也达到了3.27%。对于原发性和获得性MET扩增的患者，使用克唑替尼进行治疗，其结果在中位无进展生存期（mPFS）上并无显著差异（分别是4.04个月和2.76个月；P=0.310）。



MET扩增的发生率

治疗的次数也可能对MET扩增的发生率产生影响。在一线治疗中使用奥希替尼后出现耐药的患者中，MET扩增的发生比例大约在7-15%之间，而在接受二线治疗后耐药的患者中，这一比例则在5-50%之间。
关于MET扩增
MET基因扩增定义为每个细胞核中MET基因拷贝数≥5，包括局部扩增和多倍体。MET/CEP7≥2的患者被归类为局部扩增，而MET/CEP7＜2的患者则被归类为多体。局部扩增的DCR率为81.0%，多体的DCR率为40.0%。2022年发布的《非小细胞肺癌MET临床检测中国专家共识》中，推荐MET扩增阳性定义为MET GCN≥5或MET/CEP7>2.0。
MET扩增的检测方法
FISH技术

• FISH技术，即荧光原位杂交技术（Fluorescence In Situ Hybridization），是一种用于检测和定位DNA或RNA序列在细胞或组织中的位置的实验方法。
  
• FISH技术原理：FISH技术利用标记有荧光分子的DNA探针与样本中的靶核酸序列进行杂交。这些探针设计用来与目标DNA序列互补配对。在杂交后，使用荧光显微镜可以观察到特定DNA序列的位置和数量。
  

FISH技术是检测MET基因扩增的金标准。通过荧光探针原位标记MET基因，可以结合形态直接观察肿瘤细胞中MET荧光信号的数量，来计算肿瘤细胞中MET基因GCN；或者通过标记MET基因和第7号染色体着丝粒（CEP7），计算肿瘤细胞中MET/CEP7比值。
FISH技术优势：

• 细胞内定位：可以在细胞内精确定位特定的核酸序列。
  
• 多色检测：可以同时使用多个不同颜色的探针，检测多个不同的核酸序列。
  
• 形态学与分子数据结合：可以结合细胞或组织的形态学信息进行分析。
  

NGS技术

• NGS技术，即二代测序技术（Next-Generation Sequencing），也称为高通量测序技术，是一种能够快速、低成本地对大量DNA或RNA分子进行测序的先进技术。
  
• NGS技术原理：NGS技术通过将DNA或RNA样本打断成小片段，并对这些片段进行化学标记，然后通过测序仪进行大规模并行测序，最终利用生物信息学工具进行数据分析和解读。
  

• NGS作为MET扩增检测的方法之一，在2023年的CSCO非小细胞肺癌诊疗指南中以II级推荐用于MET扩增检测。指南也提及，若组织标本不可及，可考虑使用ctDNA进行检测。
  
• NGS技术优势：
  
• 高通量：可以同时对数百万到数十亿个DNA分子进行测序。
  
• 低成本：相比于传统的Sanger测序，NGS技术成本大大降低。
  
• 速度快：可以在几天内完成整个基因组的测序。
  
• 灵活性：可以根据研究目的设计不同的测序策略。
  

检测手段的比较
目前针对MET扩增的检测手段中，FISH检测是金标准，而包含MET扩增的NGS panel也是一种有效的检测手段，在临床上的应用也越来越广泛。


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