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请问蛋白分离纯化设备与色谱仪这两种仪器设备是什么关系?
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发表于 2024-9-19 18:47
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请问蛋白分离纯化设备与色谱仪这两种仪器设备是什么关系?
原文地址:https://www.zhihu.com/question/608714185
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发表于 2024-9-19 18:47
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简单理解,蛋白分离纯化设备是制备级或半制备级的色谱仪。
蛋白分离纯化设备和色谱仪都有泵系统,色谱柱,检测器等模块。而蛋白纯化设备因为需要收集分离组分,因此还会有组分收集模块。
在一些特殊情况下,色谱仪也可以通过多次进样收集组分来分析比较珍贵和少量的样品。
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发表于 2024-9-19 18:48
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从原理上来说两种设备的原理都是利用不同物质的不同特点将其分离开,区别在于两种设备用的分离柱不同,分离规模不同,目的不同。蛋白分离纯化设备的目的是用于生产,获得大量的纯净目标蛋白。色谱仪的目的是将样品分离开,完成对目的蛋白的检测。
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发表于 2024-9-19 18:49
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蛋白分离纯化设备和色谱仪是两种在生物化学和生物技术领域常用的仪器设备,它们在蛋白质研究中有密切的关系。
蛋白分离纯化设备是用于将复杂的蛋白混合物分离和纯化的设备。它通常包括各种分离技术和设备,如离心机、超滤设备、电泳设备等。这些设备通过不同的原理和方法,将蛋白质按照其性质、大小、电荷等特征进行分离,从而实现对目标蛋白的纯化。
而色谱仪是一种利用色谱技术进行物质分离和分析的仪器。色谱技术可以根据样品的成分、性质和相互作用,通过样品在固定相和流动相之间的分配和交换,将混合物中的组分分离开来。在蛋白质研究中,色谱仪常用于蛋白质的分离、鉴定和定量分析。
在蛋白分离纯化过程中,色谱技术经常被应用于蛋白质的分离和纯化步骤中。例如,离子交换色谱和亲和色谱是常用的蛋白质纯化方法,通过根据蛋白质与固定相之间的相互作用来分离和纯化目标蛋白。色谱仪则是用于进行这些色谱分离的关键仪器,它可以提供高效的样品分离和灵敏的分析检测。
因此,蛋白分离纯化设备和色谱仪是在蛋白质研究中相辅相成的仪器设备。蛋白分离纯化设备提供了多种分离方法和设备,而色谱仪则提供了高效的色谱分离和分析技术,二者共同帮助科研人员实现对蛋白质的纯化和分析。
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发表于 2024-9-19 18:49
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简单来说:蛋白的分离纯化中有一类叫做层析方法。层析法与色谱都是利用目标产物的物理性质(疏水性、电荷、分子大小)等将其与混合物进行分离。
所以层析法与色谱这二者仅仅是原理相同。而蛋白分离纯化设备与色谱仪则没有直接的对应关系。
下面是具体的解释:
蛋白纯化设备最常用的就是Cytiva公司的AKTA设备,包括实验室使用的Akta Pure和Akta Avant以及中试或生产用的Akta Pilot。 它其实是集成了色谱柱、混合泵、UV&电导检测器、自动进样设备、pH检测以及收集设备。看看下面的组装好的图,右侧各种接口,左侧红色部分是可以放置50mL离心管作为容器的自动收集区域。一句话,利用这一台设备,你就可以完成从上样到拿到原液的过程。甚至借助于配套的软件Unicorn,可以完成包括处方筛选、工艺优化在内的DOE实验。
图1. Cytiva公司的AKTA avant
图2. 连接好的Avant
图3. AKTA Avant收集部分
回到色谱仪,色谱仪是一个笼统的说法,气相色谱和液相色谱其实从原理上有着明显的不同。和AKTA比较接近的液相色谱。现在使用的高效液相色谱,HPLC(High Performance Liquid Chromatography)基本上都是多个设备组装的系统,同样包括液相泵、进样器、检测器、色谱柱箱。事实上也有具备简单制备能力的制备型HPLC,额外配制了一个样品收集器(Fraction Collector)。下图是经典的Agilent(安捷伦)的1260系列。
左侧堆叠了3台设备,右侧是收集装置。
HPLC主要还是用于检测和分析,相比于AKTA基本依靠UV和电导这两个参数(蛋白只需关注OD280就好了),HPLC适用的范围更广,不仅限于蛋白,小分子、核酸都是经常需要检测的样品。因此从分离的角度,可以使用反相柱、尺寸排阻柱、离子交换柱。检测器除了UV之外还有二级阵列(PDA),荧光检测器、CAD(charged aerosol detector)等。
所以总的来说,层析设备和HPLC的基础原理是相同的,但是使用范围,专注的目标和擅长的领域则有明显差别。
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