解读文献里的那些图——ELISA

风云

ELISA(酶联免疫吸附试验Enzymelinked immunosorbent assay)用到了免疫学原理和化学反应显色，待测的样品多是血清、血浆、尿液、细胞或组织培养上清液，因而没有用到组织包埋、切片等技术，这是与免疫组化的主要区别，操作上开始需要将抗原或抗体结合到固相载体表面，从而使后来形成的抗原-抗体-酶-底物复合物粘附在载体上，这就是“吸附”的含义，然后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量检测，也是检测抗原或抗体的最敏感技术之一。
简单来说就是一抗抓住抗原，自带酶的二抗抓住一抗，酶使底物反应发光。通过测光（OD值）来表示抗原的多少。当然这只是最常用的间接法。


常用的酶联免疫吸附试验有三种方法:
1.间接法
检测抗体最常用的方法, 主要用于对病原体抗体的检测。
优势：二抗可以加强信号，而且有多种选择能做不同的测定分析。不加酶标记的一级抗体则能保留它最多的免疫反应性。
缺点：交互反应发生的机率较高

2.双抗体夹心法
检测大分子抗原最常用的方法。
优势：高灵敏、高专一性，抗原无须事先纯化。
缺点：抗原一定得拥有两个以上的抗体结合部位。

3.竞争法检测小分子半抗原（药物、激素等）。
优势：可适用比较不纯的样本，而且数据再现性很高。
缺点：整体的敏感性和专一性都较差。


实验做完后通过酶标仪测出对应的OD值，建立标准曲线计算样本的浓度。
OD全称optical density，也就是光密度，也可以称为吸光度。吸光度指的是利用物质特有的吸收光谱，来鉴别物质或者测定物质的含量，也就是将一束特定波长的光通过被检测物，被检测物可以将光吸收掉一部分，通过吸光度计算被检测物的浓度。一般被检测物浓度越高，吸光度的值就会越高。注意，通过ELISA实验我们得到的是一个个的样本浓度的数值，所以说文章中涉及到的ELISA结果图一般就是对这些数据的统计分析，如：




当然有的也是直接使用测得的OD值做统计分析，如：


通过统计分析我们可以得到因不同实验条件得到的不同组蛋白量的差异是否有统计学意义，从而得到我们需要的结论。
至此，我们分享完了蛋白检测实验三巨头，那么就来汇总一下三者的区别：
免疫组化、Western、ELISA是免疫学三大工具，分别用于定位，定性和定量。
1.定位是免疫组化最大的优势
该方法可在组织和细胞中进行抗原的准确定位，因而可同时对不同抗原在同一组织或细胞中进行定位观察，这样就可以进行形态与功能相结合的研究，相比于其他蛋白检测方法，免疫组化具有定位较直接准确、定性灵敏度高，是定位检测分析首选方法对病理学领域开展深入研究是十分有意义，尤其对于有些因子的转位研究十分有用。
2.WB与IHC技术相比，定量更加准确
当然WB也可定性和定位(通过提取膜蛋白或核蛋白、胞浆蛋白分别检测其中抗原含量，进而间接反映它们的定位)，但敏感性远远低于IHC。
3.ELISA与免疫组化技术相比，定量最准确，是分泌性蛋白检测首选方法之一。
尤其对于微定量分析多个样本非常有用，所用试剂和样品量很少，结果精确。IHC针对性比较强，而且一般是以组织或者细胞为样本，而ELISA一般是使用血清或者组织磨碎液。免疫组化可以快速检测样本中抗体的阳性或者阴性，一般不用于定量检测。

原文转载自：医学僧的科研日记（ID：zzudoctor）

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