ELISA的结果不好？很可能你的第一步就做错了…

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准备ELISA的第一步是选择合适的酶标板。其实，很多小伙伴在做ELISA时都会直接用实验室中现成的酶标板，而忽略了根据需求对酶标板的性能进行考察的过程。殊不知这样做可能会对实验结果产生很大的影响。
打开网站准备购买酶标板时，不同种类、型号的酶标板会让你眼花缭乱，这时的你该如何做出选择呢？其实，酶标板的选择大有文章，本期的【i实验】将为你好好的梳理选择酶标板的思路，帮助你更好的完成实验。


一般来说，我们在选择酶标板时往往要从以下几个方面去考量：
酶标孔底的形状


现在的厂家均将酶标孔设计成独立的柱状，适当地增大孔与孔之间的距离，使之能独立分开，从而最大程度地减少交叉污染。
不同种类的酶标板其孔底的形状是不同的。小编将不同形状的酶标孔及其用途整理成了以下表格，供大家参考。


不同的结合机理
包被物质与板底表面的有效结合是ELISA中至关重要的一步。因此，在实验开始前应仔细分析待包被物质的结构特点与化学特性，以选择适当的酶标板。一般来说，包被物质与板底有三种结合方式：被动吸附、共价结合和亲和捕获。
被动吸附（Passive Adsorption）：被动吸附的机理比较复杂，包被物质与板底之间的结合主要依靠分子间作用力（范德华力）和氢键。在绝大多数ELISA中，包被物质与板底的结合都是依靠被动吸附来完成的。一般来说，中等分子量及大分子量的抗原（或抗体）与板底之间的结合是依靠被动吸附来完成的。
在挑选酶标板时通常要考虑板底表面的疏水性/亲水性特征。下表中列出了板底表面的亲水性/疏水性及与之相适应的包板物质：


下表中列出了不同亲水性的板底表面的适用范围及特点：


亲和捕获（Affinity Capture）：亲和捕获建立在标记后的大分子与其相应的受体特异性结合的基础上。标签化的大分子既可以通过化学偶联得到也可以通过基因工程的方法得到。亲和捕获的特点是：

• 特异性高
  
• 可提高测量结果信噪比
  

比较常见的孔底表面有：链霉亲和素（streptavidin）包被表面;镍螯合物（Nickel Chelate）包被表面以及谷胱甘肽(Glutathione，GSH)包被表面。机理简介如下：


颜色及材质❶ 酶标板的颜色
酶标板的颜色有三种：透明、黑色、白色。
绝大多数ELISA都选择透明板作为实验材料。白色和黑色的酶标板一般用于发光检测。黑色的酶标板自身会有光吸收，所以其信号要弱于白色的酶标板。黑色的酶标板一般用于检测较强的光，如荧光检测；相反，白色的酶标板可用于较弱的光检测，常用于一般的化学发光和底物显色（如双荧光素酶报告基因分析）。
❷ 酶标板的材质
常见的材质有聚乙烯（polyethylene,PE），聚丙烯 （polypropylene,PP），聚苯乙烯（Polystyrene,PS），聚氯乙烯(Polyvinylchloride,PVC)以及聚碳酸酯（Polycarbonate,PC）。ELSIA中应用最广的材料是聚苯乙烯和聚氯乙烯。聚氯乙烯质软板薄，可剪割，价格低廉。缺点是光洁度不如聚苯乙烯板，孔底也不如聚苯乙烯平整。但相应的背景值也会有所增加。
通常要在酶标板表面进行离子接枝处理，在聚合物表面引入醛基、氨基、环氧基等活性官能团，提高基体表面的性能。
Summary
良好的酶标板应具有以下特性：吸附性能好，空白值低，孔底透明度高，各板之间、同一板中各孔的性能相近。


因此，在选择酶标板时应根据实验需求选择具有良好结合性能的板材，同时要考虑到产品质量的差异。尤其当实验的量很大时，需要对酶标板的性能进行考察。


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