小白从事IVD，应该怎么入手学习免疫?

会里很

我专科非医学毕业，生物基础还是高中，本人很喜欢生物，现在从事体外检测试剂生产，想要学习关于免疫方面的知识，有哪些入门的书或者视频吗。想要先入门，然后深入了解，现在做生产以后想要研发或者销售







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检验医师

这一篇讲一下IVD中免疫诊断的反应原理和反应模式，主要以化学发光试剂为主。
免疫诊断的检测原理是抗原-抗体的特异性结合反应，根据样品中待测物性质的不同，反应原理可分为双抗体夹心法，双抗原夹心法，竞争法，间接法，捕获法等，下面详细介绍。
一、双抗体夹心法、双抗原夹心法
这两种方法都是夹心法，区别在于最终形成的复合物一个是“抗体-抗原-抗体”结构，一个是“抗原-抗体-抗原”结构。目前的免疫检测项目中，大部分是双抗体夹心法，个别项目是双抗原夹心法。
以双抗体夹心法为例，主要反应步骤，首先是样本与包被抗体的固相混合反应，固相上的抗体与样本中的抗原特异性结合，形成“固相-抗体-抗原”复合物，随后经过清洗或不清洗，加入酶标标记的抗体，混合孵育反应，抗原再与新加入的抗体反应，形成“固相-抗体-抗原-抗体-酶”的复合物，然后经过清洗，除去未结合的组分，加入底物或激发液，发光并检测光信号，光信号与样品中待测抗原浓度成正相关。



图一 夹心法示意图

二、竞争法
竞争法主要用于化合物小分子或半抗原的检测，如甲功、叶酸、VD等项目的检测，原因主要是这些待测物分子量较小，如果采用夹心法会有空间位阻，或者是抗原只有一个和抗体的结合位点，无法形成夹心复合物。
竞争法的主要反应步骤，首先是样本和包被抗体的固相混合反应，由于固相-抗体是过量的，只有部分固相-抗体结合了抗原，还有部分的固相-抗体的结合位点是空的，然后再加入酶标记的抗原，与剩下未结合的固相-抗体进行反应，最后形成“固相-抗体-抗原-酶”的复合物，经过清洗除去未结合的组分，再加入底物液或激发液进行发光。



图2 竞争法示意图

从竞争法的反应过程可以看出，最终的反应产物，产生发光的抗原来自于外部添加，而不是样品中的抗原。样品中的抗原越多，第一步反应剩下未结合的固相-抗体越少，最后与外加抗原结合的越少，产生的发光信号月底，反之亦然。因此，竞争法的光信号与样品中待测物浓度成反比。
关于竞争法中固相和酶标浓度确定，后续再讲。
三、间接法和捕获法
间接法和捕获法的反应原理比较类似，都会用到二抗和抗原。
以间接法为例，主要反应步骤是，样本中的IgG抗体和包被抗原的固相混合反应，样本中的抗体和固相上的抗原特异性结合，反应完成后经过清洗，除去未结合的物质，再加入标记有酶标的IgG抗体（或称二抗），反应后形成“固相-抗原-抗体（IgG）-IgG抗体（二抗）-酶”复合物，再经过清洗和加入底物或激发液，发光后检测光信号，光信号的强度与样品中待测物浓度成正比。



图3 间接法/捕获法示意图

捕获法与间接法类似，区别是捕获法的固相连接是抗体，酶标连接是抗原。
间接法和捕获法主要用于IgG和IgM的检测，主要用于传染病项目，具体选择使用那种方法要根据项目特点来确定。

<hr/>免疫诊断中的反应模式主要有一步法、延时一步法和两步两清洗等，主要是根据有几个反应步骤和清洗步骤来划分。
一、一步法
主要用于夹心法或竞争法中，样品、固相、酶标一同加入到反应容器中，反应后经过一次清洗，再加入底物或激发液进行反应。整个过程中只有一次反应，一次清洗。优点是反应时间短，缺点主要是干扰或HOOK效应。
二、延时一步法
主要用于竞争法中，样品和固相先混合进行反应，然后加入酶标进行反应，反应结束后进行清洗，再加入底物或激发液进行反应。整个过程有两次反应，一次清洗。
三、两步两清洗
间接法和捕获法需要用这种反应模式，样品和固相先混合进行反应，反应结束后进行一次清洗；然后加入酶标后进行反应，反应结束后进行清洗，再加入底物或激发液进行反应。整个反应过程有两步反应，两次清洗。优点是清洗彻底，干扰小，缺点是反应时间长。
反应模式的选择要根据项目特点进行，厂家也可以根据自己仪器、试剂特点进行设计，使试剂产品性能更优。
参考文献：
1、《The Immunoassay Handbook》 Fourth Edition

卡卡

《生物化学》《遗传学》《营养学》《分子生物学》《细胞生物学》《免疫学》这些东西必须全部得学