技术｜免疫诊断试剂的开发，免疫诊断试剂的验证EP.2

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大家好，在上一篇文章当中，我们对免疫诊断试剂的验证方法进行了初步的了解，今天我们将来了解一下关于免疫诊断试剂的开发。

这个时候，应该有同学要问了，这不是在讲免疫诊断试剂验证的文章嘛，为什么要讲开发呢？这是因为开发是围绕设定目标进行的，而验证是来证明开发成果达到了目标，所以，如果对开发完全没有认识，那么验证方案设计也就是空中楼阁。

这一点在免疫诊断试剂项目立项时特别明显，项目立项过程中所谈到的可行性研究，就涉及到一个检测方法是否能实现其预期目的的可能性，以及该检测方法的性能特征是否适合研究的需要。

而整个免疫诊断试剂的开发和优化活动，都是为了让研发人员认为这个试剂已经「准备好进行验证」了，所以这意味着在开发过程中产生的大量数据，可以用来证明试剂的潜在可靠性和对其预期目的的适用性。

在试剂开发过程中应产生以下信息：

• 关键试剂组分的选择和稳定性；
  
• 检测形式的选择（抗体、稀释剂、平板、检测系统等）；
  
• 标准曲线模型的选择；
  
• 样本类型的选择；
  
• 试剂的特异性；
  
• 样本制备和初步性能评估。
  

免疫诊断试剂开发阶段的目标是建立一个能够持续产生的，结果可靠的试剂，并且在这个基础上最终形成一个验证计划，并确立准确度和精确度的可接受标准。

因此，诊断试剂的开发可能是最关键的部分，因为在这里出现的错误，如使用不合适的免疫原、质量差的抗体（亲和力低、有交叉反应的倾向、不稳定）、不理想的检测格式、使用的浓度不正确以及不理想的测试成分和条件，都会大大影响整个试剂性能。

虽然免疫诊断试剂开发的初期阶段，研发人员或尝试许多不同的外购原材料，如抗体等等，但很多情况下，这些原材料都不是很适用，为了能够实现项目立项时确定的目标，有时需要考虑自己在「内部」生产这些原材料。

在后一种情况下，我们更加需要对开发有所了解。



花时间选择一个好的免疫原会节省大量的检测开发时间，并产生更好质量的免疫诊断试剂。

所选择的免疫原最好是纯的，并且结构上与目标分析物相同，如果想开发一种蛋白质分析物的检测方法，免疫原可以是整个蛋白质或来自该蛋白质高度特异区域的肽序列。

因此，我们应事先对目标分析物及其特性进行研究，以帮助设计一个能产生高特异性抗体的免疫策略。

如果开发一种用于免疫的合子-载体共轭物，应生产一组共轭物以帮助筛选过程。



如果在项目的范围内，最好是为所需的诊断试剂开发一个定制的抗体，而不是用一个已经有的抗体来开发一个检测方法，在很多情况下，这可能是一种最优的选择。

在产品开发的过程中，我总是建议「由终及始」，这是一个优秀的产品研发人员思维模型，在开始研发前，先要问自己这个试剂是用来做什么的？将在哪里进行测试？样本类型是什么？需要什么样的特异性和敏感性？

在进行抗体生产之前，回答这些问题和其他问题（具体可见EP.1的表1），就可以完善免疫原和选择策略，以提供最好的方法来产生高质量的抗体，并将其纳入所需的免疫诊断试剂和平台。

虽然多克隆抗体和单克隆抗体是目前诊断学中最常用的抗体，但重组抗体的重要性也在增加。

重组抗体选择方法的优势，如使用噬菌体作为选择方法，提供了一个便捷的途径，使富集的抗体池在所需的检测基质（如血液、血清、食物提取物或低百分比有机溶剂的缓冲液，如PBS加5%（v/v）甲醇）、温度（噬菌体可以在一定的温度范围内选择以适应检测需要）、pH、灵敏度（引入严格性使高亲和力克隆偏离）甚至时间（如选择更快的结合率）中的性能增强。



在选择方法学时，应考虑很多因素。

影响因素可能包括大小（aptens一般不适合夹心试验）、标记（直接或间接试验）、稳定性（抗体稳定性和分析物稳定性）和平台。

在许多情况下，这可能是一个根据经验测试几种检测方法学并评估最佳方法的问题。无论选择哪种检测方式，都应该对缓冲液和条件进行优化，在选择方法学的过程中，我们应该仔细考虑下述问题：

• 关于方法学选择的信息（可能包括不同方法学的比较数据）；
  
• 缓冲液和涂层浓度的评估；
  
• 最佳抗体浓度、体积和孵化时间的经验性测试；
  
• 初步的检测样本范围估计。
  

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