如何进行RT-PCR实验

Rose

来源：知乎
工欲善其事，必先利其器。
RT-PCR，生物医药研究生必须熟练掌握的实验技术，就我个人体会而言，目前的实验条件已经优化到效率是以前的十倍甚至更多。当然，试剂也更便宜。
刚开始，使用的是八连管，然后是96孔板，现在直接上384.一板子下去，呼啦啦一堆数据。
这是八连管，


<hr/>96孔板


<hr/>384只需要10微升体系，SYBR减半。


<hr/>RNA提取从最初的Trizol到现在成熟的kit，方便快捷。逆转录和定量也是从以前的罗氏，到用了多年的takara，到现在的一步法反转录加qPCR。takara我用过很多年，比罗氏那套好用不少。


<hr/>今年新用的一套kit，妈耶，比takara那个效率更高，直接起飞，而且是国产，你们也知道，我是支持国产的，性价比高。目前还可以白嫖，免费申请适用装。
RT-PCR，就是检测mRNA水平的，提取，逆转录，SYBR检测。咱们看看到底有多便捷。
RNA提取得过程之前分享过，链接如下
<hr/>提取之后就可以检测了说明书如下，缺点就是50ul的体系有点夸张了。




<hr/>咱们可以先逆转录


然后用SYBR定量。


<hr/>如何做好RT-PCR实验
RNA质量有保障，不纯的纯化一下。
引物要合格，可以设计两对引物
加板快稳准。
分享一个引物在线的数据库primerBank，好用。


<hr/>
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