免疫诊断试剂盒一般开发流程-经验分享

空白派

作者：知乎
作为一名从事体外诊断试剂开发工作近20年的从业者，总希望将自己踩过的坑，取得的经验来分享一下。今天从免疫诊断试剂盒开发的流程开始，希望对广大后进的同行们能有帮助。



免疫诊断试剂开发流程图

以上是一张免疫试剂开发流程图，我们按照此流程来展开：

一、设计开发策划、输入完成后，我们将正式步入开发阶段。此阶段的核心任务是根据输入的各类法律法规、标准文件，构建符合自己公司实际情况的标准草案。接着，依据标准草案，准备企业标准盘。在此过程中，我们特别强调使用临床血清作为标准盘的制备原料，以保证结果的准确性。同时，在处理临床血清时，我们必须排除所有可能产生的干扰因素。对于标准盘的构成，除了基础的线性、准确度、精密度等要素外，如果条件允许，加入不同浓度梯度的单份血清样本将非常有必要。
二、原料初筛，原料是决定试剂盒质量的关键环节。在这个阶段，条件允许下我们应尽可能多的评估不同供应商的原料，以确保选取最佳品质的原料，假如有些项目有公认的原料来源，我们应尽量选择。对于抗原抗体的基本特性，我们主要关注其纯度和效价。当然，如果这些原料用于制备校准品，那么对纯度的要求可以适当放宽。
三、制备，一旦原料的基础特性符合要求，接下来便是对其性能进行深入评估。以双抗体夹心法为例，我们将交联后的抗体组装成试剂组分，同时将抗原制备成校准品。在试剂组分的制备中，抗体交联的方法是至关重要的核心步骤。我们需比较不同的交联方法对试剂性能的潜在影响，包括标记物的不同活性基团、标记物的分子量大小、亲疏水性、交联是采用共价还是非共价方式等。至于校准品，我们特别关注其稳定性和基质互换性问题。在这个阶段制备交联是仅次于原料的第二关键因素，因为试剂的性能基本上在这个阶段固定下来，下一步的工艺和反应体系优化可调整余地将进一步缩小。
四、反应体系，是基于之前的结果的进一步优化过程，如果在上一阶段中发现有几对配对原料的性能相仿，我们可以在这一步最终决定采用的原料来源。在反应体系的优化中，我们首先需要关注的是试剂的稳定性或称为可重复性。这意味着，虽然最佳性能是我们的目标之一，但在性能可接受的前提下，如何确保试剂在生产和使用过程中能够稳定地复现其性能更为重要。作为一个产品，我们最终需要的是在后期生产和使用中能够稳定地达到声称的性能，这是最关键的。如果仅仅是为了制作一批质量最优的试剂盒，那么“产品”这两个字的意义就无从谈起了。
五、在性能评估阶段，从严格意义上说，我们已经不再处于单纯的开发过程。此时，我们需要对每个输入性能指标逐一进行验证，以确保最终产品满足预设的输入要求。关于验证的具体内容，我们在此不进行详细讨论，但可以参考之前发布的关于EP文件的相关解读。
六、稳定性研究，与分析性能评估相辅相成，也是确保产品质量的重要步骤。在这一阶段，我们必须确立最终的稳定性参数，包括试剂的实时稳定性，以确定产品的有效期限；开瓶后的稳定性，用以模拟客户使用场景；以及运输稳定性，确保产品在物流过程后能够保持其宣称的性能。这些研究的目的是确保产品在整个生命周期内，从生产到最终使用的每个环节都能稳定可靠地满足预期性能。
到此，试剂盒开发流程基本结束，总结依次关键因素：原料、交联、反应体系。
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