先见：空间组学新高度，循环染色无重数

典型的HCR过程中，引发剂触发两种DNA发夹之间的级联杂交事件。

设计发夹型探针H1和H2，H1包括1´，2´，3和2四个部分，其中2和2´有18对碱基互补成双链作为H1的茎部，3为发夹结构的环部，1´为在发夹结构茎部延伸出的单链粘性末端。

H2包括3´，2´，1和2四个部分。其设计和H1相似，1，2，3可分别与1´，2´，3´互补。

当没有引发链12存在时，虽然H1和H2中有部分链可以互补，但由于H1和H2分别形成茎环，二者在溶液中均能稳定存在，不会相互杂交而彼此打开。

当加入引发链12时，12首先与H1茎部的粘性末端1´2´互补，使H1的茎环结构打开，暴露出32单链，打开H2的发夹结构，接着暴露出于与H1互补的12，可以继续打开H1，依次循环往复，形成由H1和H2交替杂交形成的长链带缺口的双链DNA聚合物。

• 其中一种发夹结构标记荧光染料，4种颜色
• 其中两种发夹结构标记不同荧光染料，6种颜色
• 其中三种发夹结构标记不同荧光染料，4种颜色
• 其中三种发夹结构标记两种不同荧光染料，比例2：1，12种颜色
• 四发夹结构标记不同荧光染料，1种颜色
• 四发夹结构标记三种不同荧光染料，比例2：1：1，12种颜色
• 四发夹结构标记两种不同荧光染料，比例3：1，12种颜色

图片来自知乎：池塘春草梦

不同循环荧光染色技术平台的差别在于：

• 1轮能标记多少靶标？

• 如何洗脱，以及可以标记多少轮？

• 信号是否可以放大？

Foresight 先见一轮最多可以染9个靶标。新高度！

HCR是具有一个尾巴的tHCR，因此产物可以通过引入洗脱链，发生支点介导的链置换反应，将产物去组装。整个过程中的孵育与清洗条件都很温和，组织不会脱落，因此，理论上可以实现无限轮次的循环。反复洗脱不影响后续的成像，

Akoya是一轮三个靶标。

TSA (Tyramide dignal amplification，酪氨酸信号放大) ：一次一种荧光染料标记一种蛋白，在一张切片上最多成像靶标少于10。

图片来自公众号【循因缉药】

为什么采用HCR技术可以放大？放大带来的好处是什么？

HCR是杂交链式反应，在目标分子存在下，引发DNA发夹交替开环自组装，形成包含大量重复单元的切口双链DNA结构

计算机辅助设计CAD-HCR，最多可以做到多少HCR引物？

通过CAD设计了HCR序列库，最大的通量在103套，目前已经验证了30套高度正交的序列。

目前验证过的抗体数量和种类？

目前，验证抗体超过100种，能够在高特异性、高灵敏的多重分析中实现平衡。

自标记抗体要求：抗体浓度≥1 mg/mL，BSA and azide Free，单次偶联不低于40μg。

目前先见的业务形态？

• 扫描系统及图像分析整体解决方案

• 抗体偶联试剂盒，五标六色，十标十一色；

• 循环荧光空间蛋白组学服务。