干货分享 | 抗体很重要! 冻融 3 次失活 50%？—— 抗体保存避坑指南 | MCE

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我知道你急，但你先别急。

尊敬的 MCE 客户，当您收到我司抗体时，您将看到：

抗体，常用于高特异性地识别和结合目标分子，从而实现定量分析、细胞标记等功能。不当保存会导至抗体活性下降，降低结合能力，引发实验结果不一致，最终浪费时间和经费，还可能得出错误的结论，影响科学发现的进程。

MCE 在线提醒：

1. 及时取件，收到快递后立即取出，检查冰袋是否完全融化。

2. 核对产品信息，第一时间阅读说明书，确认保存条件。

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抗体保存指南

抗体储存的“保存期限”长短不一，从数周到数年都有可能，这主要受抗体自身特性的影响。抗体保存期限也受到储存条件，如温度、缓冲液成分等制约。因此：

重要的事情说三遍，先看说明书，必看说明书，一定要看说明书！

不要开盖，直接离心!

为防止抗体溶液沾在管壁或管盖上，使用前请勿开盖，先离心 (约 10,000 ×g) 处理 20-30 s，使附于管盖或管壁的抗体收集于管底。MCE 保证每管产品的抗体总量达到标示含量。

分装

反复冻融会使抗体变性，导至抗体形成聚合物，从而降低抗体的结合能力。因此，我们建议分装储存——以减少反复冻融造成的损害并防止污染。

首先，分装适用于大容量抗体，如 50 μL- 100 μL。

其次，分装成小份时，具体每管分装的量建议以一次实验用完为准，且每管分装体积不低于 10 μL，注意是否需避光环境。

储存

抗体储存是关键！妥善保存可保持其活性和稳定性，延长其使用寿命，并防止污染。同时可以避免因反复冻融、降解或污染而造成的活性损失，保证抗体能够精准识别和结合目标抗原，并在实验中发挥作用。

储存须知

Butttt，抗体里可不只有抗体！

我们先来看下抗体组分中常见成分及作用。

当然，每个抗体都有自己独特的特性，如下表所示，MCE 的研发团队根据不同抗体的特性，针对性使用不同缓冲体系，并在此基础上调整蛋白保护剂的剂量，选择最合适的防腐剂，加入冷冻保护剂等，以此来实现最大的保留及呈现抗体的最佳性能，助力科研工作：

储存温度

接下来就到了我们最最最最重要的抗体储存工作！很多小伙伴们对温度很是纠结：4 ℃，?20 ℃，?80 ℃；到底哪个更好些？其实.....

就 MCE 抗体产品来说，常见保存条件如下：

• 对于短期储存：绝大多数抗体产品在 4°C 可稳定保存 1-2 周。抗体工作液建议当天配制当天使用。
  
  

• 对于长期储存：绝大多数抗体在 -20°C 下可稳定保存 1 年。
  
  

对于 MCE 其他特殊类型的抗体，如下表所示：

储存位置

储存位置？这.....平时都是冰箱哪有位置放哪里，尤其是冰箱侧门架子上，分装管刚好“站住脚”！

啊啊啊啊啊啊啊！施主请自重！万万使不得啊~

避雷！

• 避免放在门架上或频繁开关的部位：冰箱门架温度波动大，同门开冰箱门找东西时可能停留时间较长，造成的温度变化。
  
  

——将抗体存放在冰箱内侧靠近后壁的位置，这是温度最稳定的区域。

• 不要使用无霜冰箱 (自动除霜冰箱)：避雷避雷，无霜冰箱会自动升温除霜导至抗体被冻融。
  
  

总之，影响抗体稳定性的因素很多，大家一定要避免多次冻融。

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抗体搭档: 稀释液

当然，当稀释成工作液，建议当天配制当天使用。

但是自己配的稀释液总是不如商品化稀释液好用，比如抗体活性更持久，更不易长菌等。许多用商业化稀释液稀释后的抗体工作液保存一年甚至更久仍然有效，这也是商业化即用型抗体效期很长的其中一个关键原因，即稀释液配方更科学！

接下来我们拆解一个适用于 IHC 实验的稀释液配方：

成分有了，剂量有了，那我们是不是可以自己配了？

且慢，配制操作简单，但这其中的工艺可大有名堂！

实验室自制试剂无法保证配制环境无菌操作、配制批间差不可控等，这些都会直接对抗体性能产生影响。

由此可见，选用工业化生产的试剂，结果稳定性与重复性更高，给实验减少一部分不确定性。

MCE 提供多种配方的稀释液，满足不同的需求：

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保护盾: 蛋白酶抑制剂

WB 结果如同开“盲盒”？条带时有时无？若隐若现？有时候可能是因为它！—— 蛋白酶抑制剂：避免你的蛋白被降解。

一起来见证“猎杀”时刻！

使用枯草杆菌蛋白酶 Carlsberg (Subtilisin Carlsberg，SC) 对溶菌酶进行蛋白水解，然后立即添加溶解在二甲基亚砜 (DMSO) 中的 2 mM PMSF 来淬灭反应。

图 1 显示 SC 可在反应开始后 10 分钟内促进溶菌酶完全蛋白水解 。加入蛋白酶抑制剂后，不再观察到蛋白水解片段，而是在凝胶上清晰地看到一条与天然分子具有相似迁移率的条带，这表明加入 PMSF 后，蛋白水解的溶菌酶的缺口末端重新连接生成天然形式。

图 1. 溶菌酶的蛋白水解和再连接反应[1]。

难道是意外？再来测测别的——测试 PMSF 对另一种底物 d-乙内酰脲酶蛋白水解反应的影响。

d-乙内酰脲酶 (d-hydantoinase)：一种来自芽孢杆菌 AR9 的 54 kDa 单体蛋白。在 37 °C 下，以 100:1 w/w 比例的乙内酰脲酶与 SC 在 50 mM Tris pH 8.0 存在下进行蛋白水解，并通过在中间时间点收集等分试样来监测反应进程。最后，通过添加 2-3 mM PMSF 猝灭反应。图  2 表明，在添加抑制剂后，部分蛋白水解的乙内酰脲酶不再出现碎片化。

图 2. d-乙内酰脲酶的蛋白水解和再连接反应[1]。

蛋白酶抑制剂通过保护抗体所处“环境”来间接提高抗体稳定性，在抗体制剂中扮演“保护盾”的角色。主要通过阻断蛋白酶降解途径来保持抗体完整性和功能，从而提高抗体药物或诊断制剂的稳定性和安全性。

[1] Sharma A, et al. Serine protease inhibitor mediated peptide bond re-synthesis in diverse protein molecules. FEBS Lett. 2011 Nov 4;585(21):3465-70.