确保ELISA数据质量：关键指标解读

强强

    ELISA实验常用于检测和定量复杂混合物中的特定蛋白质。结果出来后，需要一定的方法来评估数据是否可靠。主要从以下几个方面进行评估：批内准确度、稀释线性、回收率、灵敏度（检测限）等。



    批内准确度

    1、批内准确度：通常指测试孔板之间的重复性。变异系数(CV)通常用于评估批内准确度，其值为标准差σ与平均值µ的比值。每个样本的%CV通常应小于10%。%CV越大，孔间差异越大，重复性越差，结果也越不可靠。

    注意：CV值过大可能由以下原因引起：移液不准确。使用前请确保移液器吸头牢固地连接到移液器上，以确保吸取正确的液体量；试剂溅入其他孔中；样品或试剂被细菌或真菌污染；试剂之间交叉污染；酶标板内温度不一致。这可以通过将酶标板置于恒温、远离气流的环境中孵育来避免；有些孔是完全干燥的。​​这需要在孵育过程中始终盖上酶标板的盖子。

    稀释线性

    稀释线性：稀释线性是指测试样品在不同稀释度下结果的准确度，不同稀释倍数下测定值与精密值的比值应在70%~130%之间。

    在没有基质干扰的情况下，无论稀释多少，测量值都与真实值一致。当存在基质干扰时，样品稀释会导至基质被稀释，从而导至非特异性结合比例降低，测量值也会随着稀释倍数的变化而发生变化。

    回收率

    回收率：回收率用于判断目标物质的检测是否受到样品基质差异的影响。例如，待测上清液中含有大量的蛋白质，可能会阻碍抗体结合，导至信噪比升高，导至检测到的目标物质浓度低于实际值。回收率是通过将已知浓度的目标物质加标到不同的样品基质中来确定的。如果平均回收率为80%-120%，则认为样品基质对准确定量分析物检测能力的影响较小。回收率=用基质稀释的目标物质检测值/用基质稀释的目标物质测定值*100%。

    如果回收率过高或过低，则表明实验体系受到较大的复杂基质干扰。例如，当将1000pg/mL的IL-2加标到空白血清中时，回收率仅为50%，这表明血清中存在干扰因素，影响抗体与IL-2分子的结合。

    灵敏度（检测限）

    灵敏度（检测限）：灵敏度是指能够与背景区分开的最低分析物水平，常被称为分析灵敏度或检测限。一般有三个指标，分别是LOB（最低检测限）、LOD（最低检测限）和LOQ（最低定量限）。LOB（Limitofblank）就是我们通常所说的空白检测限。

    LOB是指使用空白样品，在一定概率下能够测得的最高测量结果。

    LOD（LimitofDetection）就是我们通常所说的检测限，它不使用空白样品进行检测，是在测试低浓度分析物样品时，在一定的概率条件下能够测得的最低值。

    LOQ（LimitofQuantitation）就是我们通常所说的定量限。这也是通过测试低浓度分析物样品得到的一个较低的值。这个值的准确性是有要求的，也就是说，它不仅要能够检测出来，还要保证结果的准确性。打个比方：比如一个物体在远处，随着距离的缩短，你的眼睛从看不见（空白检测限）到看得见（检测限），最后到可以确认是什么物体的程度（定量限）。

    信噪比

    信噪比（S/N）是信号与噪声的比值，即样品数据与空白数据的比值。一般以信噪比为3:1时对应的浓度或量为检测限，以信噪比为10:1时的量为定量限。

    总之，评估ELISA实验数据的可靠性需要综合考虑批内精密度、稀释线性、回收率、灵敏度以及信噪比等多个指标。只有当这些指标都符合要求时，才能认为实验结果可靠，并为后续的研究提供有力的支持。良好的实验操作和对这些指标的正确理解和应用，是获得高质量ELISA数据，并最终得出可信结论的关键。如果实验结果不理想，需要仔细检查实验的每个步骤，找出可能存在的问题并进行改进，以确保最终数据的准确性和可靠性。原文网址：https://www.mlbio.cn/article-3388.html