尿蛋白测定的几种方法

John

昨天在《记录儿子肾综的治疗过程（三） - 知乎 (zhihu.com)》中提到了建议用试纸和试剂同时测定尿蛋白，但没有仔细讲。最近这段时间其实想了很多，决定以后要坚持在知乎上更新一些文章，一方面纪录一下儿子的治疗过程，自己也加强相关知识的学习。另一方面写点我技术专业（地质学）方面的文章，也是敦促自己加强工作上的学习。今天就先简单的谈一谈尿蛋白测定的集中方法。
孩子最开始病的时候，我们是可以从看病的医院的肾病研究室买到磺柳酸尿蛋白试剂的，医生也比较推荐，住院查房的时候医生也愿意看孩子晨尿滴定的结果。后来加了病友群，病友们推荐了用试纸监测，确实比较方便，后来发现有家用的尿液分析仪可以帮忙分析试纸测试结果，而不用人为去与色卡比对，就买了一台。每天测晨尿，并将结果发到家庭群里，让家人们都知道。这个测试结果其实和医院的尿常规差不多，准确度还是比较高的。


后来我们发现了《记录儿子肾综的治疗过程（三） - 知乎 (zhihu.com)》中提到的，试纸和试剂敏感度不同的问题，也查阅了一些文献，知道了其中的原因：
试纸测定尿蛋白的原理及误差原因：
（1）尿液分析仪测定尿蛋白原理是根据指示剂蛋白误差原理，模块中主要含有酸碱指示剂——溴酚蓝（pH 3.0-4.6）、枸椽酸缓冲系统和表面活性剂，在pH为3.2时，溴酚蓝产生阴离子，与带阳离子的蛋白质（主要是清蛋白）结合发生颜色变化而半定量，但是溴酚蓝只与清蛋白结合，而不与球蛋白、本周氏蛋白及其他尿蛋白发生反应，从而影响结果的准确性，在大量蛋白尿时更为明显（丛玉隆，王淑娟. 《今日临床检验学》;倪蓝，卢银红. 《磺柳酸法、尿液干化学分析仪法与双缩脲比色法检测尿蛋白定量的对比分析》），因而对尿液中出现的球蛋白，尿分析仪不易检出，须用磺柳酸法来检测（桂满元 ，黄成文。《两种尿蛋白测定方法的比较》）；
（2）尿液pH值小于8，尿液分析仪测定尿蛋白出现假阳性，pH值小于3则出现假阴性（所以用试纸测尿的时候要注意pH值），需要稀酸或稀碱来校正pH值至5-7后，再测定尿蛋白（陈盛林．《干化学法测定尿液的影响因素》）。
磺柳酸法测定尿蛋白的原理及误差因素
磺柳酸法其原理是磺基水杨酸为生物碱试剂，在酸性环境下其阴离子可与带正电荷的蛋白质结合成不溶性蛋白盐沉淀。该方法经济方便，但影响因素较多，如使用某些药物（如青霉素钾盐、复方新诺明、对氨基 水杨酸等）和有机碘造影剂，以及尿内含有高浓度尿酸、草酸盐或黏蛋白时，此法可呈假阳性反应，而患者服用某些药物引起 强碱尿时此法出现假阴性结果。



（《临床检验》，全国中等卫生学校较差编写组），有对比图，我暂时没找到。

另外，简单介绍一下怎么制备浓度5-10%的磺柳酸试剂，为什么选择这个浓度？也是读了几篇文献，大多数研究成果标明10%的灵敏度最合适，浓度太高，假阳性的情况会增多，浓度低于5%，假阴性的情况会增多。根据我家实际使用情况，我个人推荐制备10%浓度的试剂。

• 称取：准确称取10克磺柳酸粉末。（试剂网上有卖的，我买的是二水合5-磺基水杨酸，根据分子式计算，需加11.7克）。
  
• 溶解：将称取的磺柳酸粉末加入约90毫升的50%酒精溶液（或蒸馏水）中，充分搅拌至完全溶解。
  
• 定容：将溶液转移至100毫升容量瓶中，摇匀。
  
• 保存：将配制好的10%磺柳酸水溶液贮存在棕色瓶内（一定要放在深色瓶，这个溶液见光易分解，其实每天只需要滴5-7滴，所以建议每次配置50ml，基本能用2个月，2个多月试剂就开始变质了），放在阴凉避光处保存。
  

今天就写这么多吧，有问题可以留言讨论。

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