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多糖的分离纯化是后面对其进一步研究的基础。对于刚刚接触多糖分离纯化的科研小白而言,掌握分离纯化所需要的装置及每部分装置的作用是至关重要的,今天主要分享一些关于多糖分离纯化的基础装置,如有总结不到位或者不正确的地方欢迎大家补充修正。
装置构成
一般而言,多糖的分离纯化装置主要包括梯度混匀仪、蠕动泵、层析柱以及样品收集器四个部分组成,在使用时,按照顺序将其连接。
梯度混匀仪
梯度混匀仪可以使洗脱液的组份按设定的方式逐步变化,以此来控制洗脱液的溶度。在仪器构造上主要包括控制器和杯体两部分,两个杯体之间联通,可以通过调整连通阀门来控制不同浓度溶液的混合速度及浓度变化的线性梯度,另外,两个杯体中会放置转子,通过控制其转速可以使在溶液溶度保持一致。在使用的时候可以既可以用恒定浓度的洗脱液洗脱,也可以用不同浓度的呈线性的洗脱液进行洗脱

图1. 多糖分离纯化基础装置
蠕动泵(恒流泵)
蠕动泵又称为恒流泵,前与梯度混匀仪连接,后与层析柱连接;一般的蠕动泵有定时模式和定速模式,在多糖的分离纯化中,应用比较多的是定速模式,通过控制洗脱液的流速来发挥作用。在之前的多糖分离纯化中,经常用的流速为1-3 mL/min。
层析柱
装柱:柱子填料用超纯水洗涤干净之后,先加入大概三分之一的水之后再用玻璃棒导流倒入填料,静置,待出现明显的分层现象之后继续加入凝胶。如果加完凝胶之后液面不平可以用玻璃棒搅拌静置。先用纯水洗脱一会,待稳定之后,加入滤纸,再用配好的PBS洗一下,待PBS充满柱子之后加样品。
每次使用柱子后,要对其进行洗涤,去除杂质,以保证其性能。洗涤时,先将凝胶倒入干净的烧杯中,加入两倍体积1M的氢氧化钠,搅拌、静置、倒上清,洗涤三次左右,根据凝胶的颜色而定,如果凝胶的颜色过深可以多次洗涤,然后用超纯水洗涤至呈中性。
样品收集器
根据样品收集器的型号和功能,可以对洗脱液进行编程设置,包括洗脱液的管数,每管的时间,以及流速等。在洗脱的时候应先用纯水跑一段时间,待流速稳定之后再测定,以保证每管的体积相同。在一般情况下,设置70管比较多。
以上就是关于多糖分离纯化基本装置的主要介绍,欢迎大家批评指正及补充~ |
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