流式专题（四） | 细胞因子和细胞活性氧检测

临床医师

细胞因子检测
细胞因子是免疫细胞对病原体、自身免疫或治疗药物的激活反应所必需的小分子。细胞因子的信号传导可以调节基因调控、先天免疫反应和适应性免疫反应以及炎症。因此，测量细胞因子产生并确定细胞因子产生的来源对于深入了解免疫反应非常重要。基于微球的流式细胞术检测是测量细胞因子的高效方法，可以使用具有不同荧光强度的混合微球来测量单个样品中的多种可溶性分析物。
检测细胞因子目前主要有多种方法：包括ELISA法、胞内染色法（intracellular staining assay）、Legendplex多因子检测、Luminex、CBA法，后4种就是利用流式细胞术的方法检测细胞因子。



生成细胞因子的主要细胞类型

细胞活性氧检测
CM-H2DCFDA在细胞内水解成DCFH , DCFH被胞内的氧化剂氧化成高荧光强度的DCF ，用于检测ROS 的生成。Dichlorodihydrofluorescein diacetate (DCFH-DA)是非极性的化学物质能自由通透细胞膜。进入细胞后，被easterase去掉两个乙基, 形成具有极性的2’,7’- dichlorodihydrofluorescein(DCFH), 保留在细胞内。当细胞产生H2O2与DCFH反应,使DCFH形成了2’,7’ –dichlorodihydrofluorescein(DCF)，通过流式细胞仪测定细胞内DCF的荧光强度，即可对单个细胞为基础的细胞内ROS进行原位实时检测，从而根据荧光强度直接反映细胞内自由基的变化程度。



用流式细胞仪和DCFH-DA（n=3）检测H2O2(200 μM)处理H9C2心肌细胞6、12h后的ROS水平的结果

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