免疫荧光

千姿百态

免疫荧光(Immunofluorescence，IF)技术是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术，将抗体分子与一些示踪标记结合，利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位和定量。免疫荧光技术可以对目的蛋白在细胞中的定位提供更高的分辨率、更高的灵敏度，是目前在细胞水平进行蛋白量(定性为主)及蛋白定位分析最常用的方法。
载基可将玻璃切片上的所有信息进行采集形成高分辨率的数字切片，防止荧光淬灭；可任意倍数进行观察；可满足临床、科研、教学等多种用途。
载基优势：
采用进口abcam、CST、Santa、omnimabs抗体；
光学显微镜和荧光显微镜齐全，一站式完成实验；
具有多年免疫荧光实验经验；
可免费使用我司细胞库、组织库已有细胞或石蜡切片，无需购买；
提供完整的实验数据及实验报告(包括实验仪器、试剂、方法步骤、结果、数据分析、结论等)。
实验流程：
细胞爬片固定/石蜡脱蜡至水-封闭-孵育一抗-孵育荧光二抗-封片镜检
实验步骤：
1、石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ 5min-二甲苯Ⅱ 5min-二甲苯 III 5min-无水乙醇1min-95%乙醇1min-85%乙醇1min-75乙醇1min-65%乙醇1min，自来水洗。
2、抗原修复：将EDTA抗原修复液（PH9.0）用蒸馏水稀释50倍，并加热至沸腾。将脱蜡水化后的切片置于耐高温染色架上，放入不锈钢锅中；将功率调至最小(处于保温状态)，盖上锅盖，继续加热20分钟后，离开热源，自然冷却10分钟；用自来水冲淋不锈钢锅外壁使之冷却，待锅中液体冷却至室温后取出切片;蒸馏水冲洗3分钟x3次；用PBS溶液冲洗3分钟x3次；
3、灭活：除去PBS，在切片上滴加内源性过氧化物酶阻断剂，室温下孵育10分钟，用PBS溶液冲洗3分钟x3次；
4、封闭：除去PBS，在切片上滴加5%BSA封闭液室温下孵育30min；
5、加一抗：轻轻甩掉封闭液，切片上滴加第一抗体，4度孵育过夜（湿盒内加少量水防止抗体蒸发）；
6、加二抗：取出湿盒，复温40min左右，用PBS溶液冲洗3分钟x3次，除去PBS，切片上滴加与一抗相应种属的荧光二抗，室温下避光孵育1h，PBS冲洗3x3分钟；
7、DAPI 复染细胞核：除去PBS,切片稍甩干后在圈内滴加 DAPI 染液，避光室温孵育 10min，PBS冲洗3x3分钟；
8、淬灭组织自发荧光：除去PBS，在圈内加入自发荧光淬灭剂 避光室温孵育5min，流水冲洗 10min；
9、 封片：切片稍甩干后用抗荧光淬灭封片剂封片；
10镜检拍照：切片于荧光显微镜下观察并采集图像。（DAPI 紫外激发波长 330-380nm， 发射波长 420nm，发蓝光；FITC 激发波长 465-495nm，发射波长 515-555 nm，发绿光；CY3 激发波长 510-560，发射波长590nm，发红光。
结果观察：DAPI 染出来的细胞核在紫外的激发下为蓝色，阳性表达为相应荧光素标记的红光或绿光。







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