免疫诊断试剂盒开发中常用缓冲液汇总

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在免疫诊断试剂盒开发中，缓冲液扮演着至关重要的角色，其主要作用包括：维持pH稳定、提供适宜的离子强度、兼容性、减少非特异性结合、促进免疫反应等。今天我们把一些常用的缓冲液做一个介绍。
磷酸盐缓冲液（PBS）：由磷酸氢二钠和磷酸二氢钠按照不同比例配制而成。常用的缓冲范围在pH5.8-8.0，使用浓度为0.1-0.2M。用途：可以用于样本稀释、试剂的配制、洗涤液配制等。优点：1）生物相容性：PBS对蛋白质类生物大分子相对温和，不会引起变性或损伤；2）稳定性：PBS在储存和使用过程中稳定性好，不易受外界环境影响；3）离子强度：PBS提供了适当的离子强度，有助于维持生物分子的结构稳定；4）无毒性：PBS成分简单，无毒性，适合用于生物样本和试剂的处理。缺点：1）潜在的微生物污染：PBS如果不添加防腐剂，容易受到微生物的污染；2）缓冲能力限制：在极端pH变化的情况下，PBS的缓冲能力有限，可能不足以维持稳定的pH值；3）易与常见的钙镁离子及金属离子缔合成沉淀。
Tris-盐酸缓冲液：由三羟甲基氨基甲烷（Tris）配制而成，盐酸用于调整其pH，Tris使用浓度为0.05M。常用的缓冲范围在pH7.0-9.0，最佳缓冲区间大约在pH 7.5-8.5。用途：可以用于进行试剂的配制、蛋白质电泳、抗原和抗体稀释等。优点：1）溶解性：Tris能够很好地溶解在水中，便于制备不同浓度的缓冲液；2）稳定性：Tris-HCl缓冲液在储存和使用过程中稳定性较好；3）缓冲范围：Tris-HCl缓冲液的缓冲范围在中性偏碱，适合保护含酶的试剂组分；4）低毒性：Tris是一种低毒性的化学品，适合用于生物实验。缺点：1）温度效应大：温度变化对缓冲液pH值的影响较大；2）潜在的离子干扰：Tris-HCl缓冲液中的氯离子可能会在某些实验中引起干扰；3）成本：相比于PBS等缓冲液，Tris可能成本较高。
HEPES缓冲液：由4-（2-羟乙基）-1-哌嗪乙烷磺酸（HEPES）配制而成,使用浓度为0.02-0.05M。常用的缓冲范围在pH 6.8-8.2，最佳缓冲区间在pH 7.2-7.8。用途：可以用于进行试剂的配制、细胞培养、抗原和抗体稀释等。HEPES缓冲液的优点同Tris-盐酸缓冲液相似，HEPES有更低的离子强度和渗透压，适合一些对离子强度敏感的项目；缺点方面HEPES缓冲液如果不添加防腐剂，容易受到微生物的污染。
MES缓冲液：由2-（N-吗啉）乙磺酸（MES）配制而成, 使用浓度为0.05M。常用的缓冲范围在pH 5.5-6.7，最佳缓冲区间大约在pH 5.5-6.0。用途：可以用于进行试剂的配制。优点：1）缓冲范围：MES的缓冲范围适合需要微酸性环境的实验，如吖啶酯类标记组分的长期保存；2）低离子强度：MES缓冲液的离子强度低；3）稳定性：MES缓冲液稳定性好；4）低毒性：MES是低毒性的化学品，可用于生物实验。MES的缺点同HEPES缓冲液一样。
MOPS缓冲液：由3-（N-吗啉）丙磺酸（MOPS）配制而成, 使用浓度为0.01M-0.05M。常用的缓冲范围在pH 6.5-7.9，最佳缓冲区间大约在pH 6.8-7.4。MOPS的缓冲范围在略酸性至中性的环境，其他的优缺点与MES一致。
ACES缓冲液：由N-氨基甲酰甲基乙磺酸（ACES）配制而成, 使用浓度为0.01M。常用的缓冲范围在pH 6.0-8.0，最佳缓冲区间大约在pH 6.8-7.2。用途：可以用于进行试剂的配制、蛋白质电泳等。ACES缓冲液的缓冲范围在中性附近，且缓冲范围较小是个主要缺点。
碳酸盐缓冲液（CB）：由碳酸钠和碳酸氢钠按照不同比例配制而成。常用的缓冲范围在pH8.3-10.3，使用浓度为0.01-0.05M。用途：可以用于进行包被缓冲液、洗涤液配制等。优点：1）蛋白质吸附：碱性环境有助于蛋白质更好地吸附到固相表面上；2）离子强度：CB提供了适当的离子强度，有助于维持生物分子的结构稳定；3）易于配制和使用：CB缓冲液的成分相对简单，易于配制和使用。缺点：1）对空气中CO2敏感：暴露空气中易被CO2影响其pH。2）碳酸盐的溶解度：碳酸盐的溶解度有限，高浓度的碳酸盐可能导致溶液浑浊。
柠檬酸缓冲液（CA）：由柠檬酸和柠檬酸钠按照不同比例配制而成。常用的缓冲范围在pH 3.0-6.2之间，使用浓度为0.1-0.2M。用途：样品处理、试剂的配制等。柠檬酸缓冲液通常被用于对酸性需求大的反应体系中。



常用缓冲液的pH范围图   

       在选择缓冲液时，其缓冲范围是选择的第一出发点，同时结合离子强度、兼容性、成本等诸多因素进行综合考虑。希望阅读更多体外诊断试剂研发方面的干货，请关注微信公众号：体外诊断研发大杂烩。



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