PCR扩增的增强剂和抑制剂有哪些？

生物科研实验室

1增强剂

1. 激活剂：激活剂通过改善聚合酶的活性，让整个PCR过程焕发活力。10~100ug/ml BSA（牛血清白蛋白）就能在某些情况下提升聚合酶的稳定性和活性。

2. 保护剂：保护剂的作用在于防止模板DNA降解，确保DNA的完整性。如T4基因32蛋白能保护单链DNA不受核酸酶攻击。

3. 增效剂：增效剂能够提高引物与模板间的亲和力，从而提升扩增的特异性。1%~10%DMSO（二甲基亚砜）就是一种常用的增效剂，能使PCR反应在较高温度下进行，有助于解决模板二级结构引起的问题。

4. 促进剂：促进剂填补反应体系中的空隙，为聚合酶提供适宜的工作环境。例如，5%~20%甘油或1.25%~10%甲酰胺可以在某些困难的扩增中作为促进剂使用。

5. 净化剂：净化剂清除可能干扰PCR反应的杂质。例如，某些特殊的蛋白酶抑制剂可以防止样本中的蛋白酶干扰反应。

6. 调节剂：调节剂负责微调PCR反应的各项参数，如离子浓度等。Mg^2+浓度的适当调整就能显著影响PCR的特异性和产量。

7. 链接剂：链接剂加固引物与模板之间的连接。比如，有些特定的寡核苷酸可用作“锁式探针”，与目标序列形成稳固的结构，以辅助扩增。

2抑制剂

SDS:离子去污剂，0.01%即可完全抑制PCR反应，0.005%可显著降低产量

苯酚:0.5%即可完全抑制PCR反应，0.2%可显著降低产量

乙醇:大于1%的浓度可抑制PCR反应，但在某些体系里又能增加产量

异丙醇:抑制作用比乙醇稍强

乙酸钠:大于5mM时抑制PCR反应

氯化钠:大于25mM时抑制PCR反应（生理盐水无影响）

EDTA:0.5mM可使PCR产物减少，1mM完全没有PCR产物

血红素（heme）-来源：血液，大于1mg/ml抑制PCR反应

氯高铁血红素（hemin）：大于0.1ng/μl抑制PCR反应

丹宁酸（tannic acids）：大于0.1ng/μl抑制PCR反应

肝素：大于0.15IU/ml抑制PCR反应

尿素-来源：尿，大于20mM时产生抑制

腐殖质-来源：土壤，植物材料，自然界水

植物多糖-来源：粪便，植物多糖

聚苯乙烯，聚丙烯-来源：紫外线照射塑料管
胆酸盐-来源：粪便
胶原质-来源：组织
靛青染料-来源：粗斜纹棉布，牛仔裤

蛋白酶-来源：牛奶

钙离子-来源：牛奶，骨头

铁离子-来源：血液

二甲苯胺

溴酚兰

胆红素（bilirubin）

其他抑制剂