病理染色、蛋白条带别慌张，MDL帮你一起解决那些常见的小困惑

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近来，病理和蛋白粉丝呼声较高，今天小助手又总结了一期关于病理、蛋白的实验问题，帮助大家有效解决那些在实验中遇到的小困惑。

做完病理如何看病变区别？

阅片分析看组织结构的变化、细胞结构的变化。

怎么判定结果好坏？

通过阅片分析，病理变化符合实验目的的结果即为满意。

组化实验的注意事项？

1）烤片要充分

2）脱蜡要彻底

3）修复要到位

4）抗体尽量选择效果好的，抗体稀释比例要合理

原位杂交需要注意什么？

1）所有试剂都要用灭菌的DEPC·H₂O配

2）配试剂用到的量筒需要180℃烘6小时

3）加探针后一定要放在65度48小时

4）原位杂交第二天，不再需要用DEPC·H₂O配制试剂

病理染色分为哪几个，各过程有什么区别？

HE、免疫组化、TTC染色、masson染色、鬼笔环肽染色。

为什么病理报告要等那么久？

1）首先要取材，20只小鼠大概需要6-8小时

2）根据组织固定，如果组织比较小的话固定液充分至少需要12小时

3）软软的组织是不利于切片的，需要脱水大约需要18个小时

4）之后包埋，制作成蜡块，然后才是我们熟悉的切片，将蜡块切成4微米左右的组织白片，进行脱腊水化

5）之后进行染色才能在显微镜底下观看，如果是HE染色一架切片30张染色过程大约需要45分钟

6）免疫组化的话，大约需要两天，染色完成后还需要拍片观察。

7）最后才是技术人员签字，这样完整的病理报告就诞生了。

条带上出现不均匀的白色斑点时，是什么原因？如何解决？

原因：转膜时有气泡，或膜上抗体分布不均匀

解决办法：转膜前小心去除气泡，抗体孵育时保持摇动

21kd蛋白显出来雾蒙蒙一片，maker都看不到怎么办？

控制好电泳温度（4℃），浓缩胶电泳阶段延长时长，分离胶电泳时间缩短。

跑出来的分子量比说明书的分子量小三十左右是为什么？

可能是同一基因不同的剪接mRNA的翻译产物；也可能是目的蛋白有前体和成熟体，二者相差大约30Kd；

有些蛋白表达量很低，用30ug根本测不出来怎么办？

加大上样量，但是杂带会比较多，可以做个富集试试

这一期的实验问题就到这里啦，如果您还有其他在实验当中遇到的问题，请扫描下方二维码添加“MDL科研助手”的微信，私信小助手，小助手会帮您一起搞定实验。