磁珠法DNA纯化的小技巧~

但即使是这种看似简单的技术也可能出错，并提供次优的 DNA 最终产物。为了帮助确保 simple 保持有效，以下是我使用磁珠从 DNA 纯化中获得最佳结果的七个技巧：

（1）不要冻结您的磁珠

永远不要冻结你的珠子。除非另有说明，否则磁化珠子永远不能被冻结。珠子应始终保持在 2 至 8ºC 的温度下。冷冻和解冻可能会导至珠子表面出现裂缝。这可能会导至样品污染 - 与您想要的相反。

（2）将微珠置于室温下

虽然您的磁珠应储存并保存在 2 至 8ºC 下，但您需要在使用前将其置于室温下。因此，请提前计划，并确保在需要珠子前 30 分钟将珠子从仓库中取出。这段时间将使珠子有时间预热。

（3）均质化您的磁珠

当您从仓库中取出珠子时，您很快就会意识到您的珠浆不均匀，颜色也不均匀。相反，您会在试管底部看到棕色珠子沉淀。随着分子生物学实验室的讨论，磁珠是巨大的！因此，它们在储存过程中会沉淀下来，这并不奇怪。但是，您需要均匀的珠浆，因此在使用珠子之前立即涡旋。确保对珠子进行涡旋，直到浆液呈均匀的颜色，并且所有珠子都处于悬浮状态。如果您的磁珠悬浮液不是均质的，则可能会危及您的方案;如果您继续使用相同的珠子，则您当前的 1 个或以下的 1 个。这是因为......

（4）您必须知道您的 DNA-Bead 比率

协议是有原因的，确切的数量很重要。磁珠起始量与您应该获得的 DNA 量直接相关。珠子太多，您可能会得到污染物。珠子太少，您可能会损失产品。因此，当您移液磁珠时，请务必清理掉挂在移液器吸头外侧的任何液滴。当然，请确保使用良好的移液规范，包括定期校准移液器。

（5）注意您的磁性支架

确保选择适合您所用产品的磁力架 - 无论您使用的是 8 联管、96 孔板还是 MIDI 板。洗涤方案通常包括许多“去除上清液并丢弃”的步骤。在这些步骤中丢失一些磁珠是正常的，但您希望尽量减少磁珠损失——当然，因为您的样品会附着在磁珠上！而且，我相信您和我一样担心在洗涤过程中丢失样品。因此，请使用合适的磁力架。除了尺寸之外，机架的磁铁位置也各不相同。磁体放置会影响磁珠的聚集位置 - 无论是在孔的底部、左侧、右侧还是呈环状构象。如果您的说明书没有指定哪个支架最好，您可以根据个人喜好进行选择。只需注意你正在使用的东西！您需要从聚集的磁珠中移出，以尽量减少意外吸走磁珠。并尝试找到具有良好磁强度的支架。

（6）小心移液

您当然知道这一点，但以下是我经验丰富的移液建议：吸液时：
保持手指稳定。现在不是匆忙的时候，也不是在拿铁咖啡中多喝一杯浓缩咖啡的日子。
不要吸气太快。慢慢来，因为吸液的强度可以克服磁力，并且您可以吸吮移液器吸头上的珠子。

（7）监控您的损失

如果您想知道您损失了多少磁珠（和样品），那么我建议您为每个样品保留一个“废液井”。换句话说，收集所有吸出的洗涤液。最后，您可以将这些废料很好地放在磁力架上，并实际查看每个洗涤步骤损失了多少珠子。这可以帮助您阐明为什么某些示例可能比其他示例效果更好。不是定性的，但仍然有帮助。如果您拥有良好的磁珠使用方法、稳定的手指和专注的眼睛，我保证您会将磁珠浪费降至最低，并增加纯化样品的保留率。洗涤快乐！