| 重庆的装备会上公布《病原体核酸快速检测临床规范化应用专家共识》非正式稿。本专家共识适用于开展病原体核酸快速检测的医疗机构临床实验室。本专家共识对存有争议的内容，进行详细描述、界定和要求。就例如开展条件、人员资质、分子POCT的定义等等。本篇就跟随大浩的思考一起来简析这篇非正式发布的专家共识!早期、准确地明确致病病原体，是感染性疾病诊断、抗感染治疗和改善预后的基础。病原体核酸扩增检测是感染性疾病准确诊断的重要方法。因此近年来，病原体核酸扩增检测向着POCT方向发展，因其操作简便、检测时间短、对实验室空间场地要求低等优点，对快速实现患者分流、明确病原体和制定治疗方案具有重要价值。其一：实验室建设中关于人、机、料、法、环的要求是否可以降低。其二：在使用一体化设备完成检测的情况下，如何保证检测结果的可靠性。再来看其对于分子POCT的特点的描述。本共识适用的病原体核酸快速检测应具备以下四个特点： 一体化。标本预处理（如涉及）、核酸提取和扩增检测等环节应整合在同一设备内完成。 全封闭。标本预处理（如涉及）、核酸提取和扩增检测等环节应在同一密闭模块内完成，期间无需开盖操作。 速度快。检测全过程所需时间应明显少于常规实时荧光PCR，应可在40分钟以内完成。 小型化。核酸快速检测设备体积小，可便携。常规PCR扩增管无法实现完全密闭，使用常规PCR扩增管的核酸快速检测不在本共识讨论范围内。 大浩认为上述内容与其说是在描述分子POCT的特点，其更像是详细解释分子POCT是什么样的，这也是为后面管理和区分产品提供依据。而本共识确认围绕五个关键问题：实验室总体要求、标本采集及运送和保存、标准操作程序及性能验证、结果分析和报告、室内质量控制和室间质量评价。进入正题！过往分子POCT开展中最被质疑的是，其在非PCR实验室开展的合规性？分子检测的特殊性决定，为了避免污染、保证结果准确。常规分子检测需要在PCR实验室内，并通过分区完成不同阶段的操作。虽然2021年发布《病原体核酸即时检测质量管理要求专家共识》中明确提出分子POCT可以在非PCR实验室内开展，但详细要求开展分子POCT检测，需要有生物安全柜、高温灭菌器等二级实验室必备设备。但现实情况是很多终端在门急诊、发热门诊以及非PCR实验室开展分子POCT时，因为空间和费用等因素无法全部配置二级实验室必备设备。因为合规性和必要设备的制约，致使很多终端在上述空间开展分子POCT检测时显得比较犹豫。专家共识1明确写出，在经过检测系统无样本间交叉风险和扩增产物污染风险后，分子POCT无需分区，仅需一个独立通风的实验室，且实验室可以开展其他项目（如血常规、生化类检验）。和常规病原体核酸检测公用区域，分子POCT可以放在二区。其余耗材和试剂可以放在试剂耗材库储存。1.经过验证的分子POCT可以放在通风的非PCR实验室内。2.经过验证的分子POCT可以和血常规生化放在一起。这样临检，尤其是可以在采样窗口进行采样，直接进行检测。（临检测更快符合需求）。3.就算和常规分子检测共用实验室，分子POCT仪器可以不用放三区，直接放二区，省去以前二区加样，三区上机的“麻烦”。专家共识3明确指出，涉及样本加样等“开盖”操作实验室宜配置生物安全柜，全程不涉及“开盖”则无需配置生物安全柜。再翻译一下，不仅分子POCT可以在非PCR实验开展，且涉及“开盖”操作建议优选在生物安全柜内操作，但不强制在生物安全柜内操作。这2个共识的“组合拳”下来，相信正式版出炉应该能打消不少终端开展的顾虑，也给了分子POCT企业推广的动力。采用强阳性样本和阴性样本交叉放置的模式，至少连续检测5批。如阴性样本结果均为阴性，说明无样本间交叉污染。上述每批实验完成后，分别对各检测模块外表面用拭子进行擦拭采样，用标本保存液或生理盐水洗脱拭子，将洗脱液作为待测样本上机检测。若检测结果为阴性，则说明为无扩增产物残留污染，检测系统的密闭性良好。如果为多重病原体核酸检测，至少选择一种病原体完成样本间交叉污染和扩增产物污染风险确认。共识4中表明，参与分子POCT实验人员需要参加临床基因扩增检验试验技术人员上岗培训，以及制度化内部培训和考核通过，确认能力后方可从事核酸快速检测。较为遗憾！在美国分子POCT是具有中等实验室技能豁免的产品，意味着美国护士是可以进行分子POCT操作的。而本共识和上述提及的质量共识依然还是要求专业资质、专业技能的人员操作分子POCT。1.推荐分子POCT检测用企业自己获批的采样器，也是推荐不强制。2.企业需要提供涉及检测的所有性能数据，例如检出限和精密度，相当于使用产品的临床实验室要对产品性能充分了解。且应该使用获得NMPA批准的产品。共识5中规定分子POCT可以使用的样本包括咽拭子、鼻拭子、BALF、血浆、脑脊液等。这对于样本的采样、运输和保存提出要求，大浩认为采样是检验中关键的一环。此外对于样本的质量要求和拒绝要求、保存温度与时间，样本加入检测模块后至开始检测的最长允许时间都应该由企业提供。由于是即时检测所以不推荐院外送检。共识6中则详细说明分子POCT的在开展检测前的性能验证方案，分子POCT通量较低，因此其性能验证方案被简化。包括的项目包括不限于，LOD和精密度的检测，使用弱阳性质控品（LOD的1.5-3倍）和阴性质控品各1份。使用2个质控品重复最少3次的方式验证不同的性能指标。但是在日常检测中必须持续通过质量控制，持续检测上述弱阳质控品和阴性质控品的检测结果。比较有意思的是共识7，由于病原体核酸快检在一体机内完成，所以企业需要提供可监测，样本预处理、提取、扩增和检测过程中的有效性质控方法，例如内参等。但是熟悉分子尤其是分子POCT的朋友应该了解，内源性内标，参与样本检测全过程，因此可以监控检测全周期。外源性内标，则是上机前加入检测模块（外源性内标通常不参与痰液和BALF的样本预处理），因其不参与样本预处理过程。这样外源性内标就不符合共识要求？不知道背后的寓意究竟何为。最后的共识8提出实验室应进行室内质量控制，每次开机先检测弱阳性和阴性质控品。若为多重病原体检测，宜尽可能轮流检测不同病原体的弱阳性质控品。实验室应该常态化参与病原体核酸检测室间质量评价。共识8还挺合理，就是不知道多少终端可以完成？另外每次开机质控的成本谁承担？室内质量控制，使用是第三方的质控品（非院端非企业），所以企业应先和一些三方质控品公司达成合作，提前优化产品性能和做好适配工作。已经有很多分子POCT产品参与过室间质量评价，这点不多讲！共识最后一句原文提及本共识将适时修订，以满足临床规范化的应用需求，当然大浩还是希望正式版出炉时能更加完善细化。但无论如何本专家共识这都给分子POCT企业和从业者注入新的动力！起码不强制使用生物安全柜、非PCR实验内开展、简化的性能验证方案都是利好分子POCT后续开展。
| 
/3 
浙公网安备33010802005999号 
