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[分享] 微生物实验室常见20种培养基配方大全

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发表于 2019-1-9 16:57:10 | 显示全部楼层 |阅读模式

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一、糖发酵管
成分:
牛肉膏 5g
蛋白胨 10g
氯化钠 3g
磷酸氢二钠  2g
0.2%滇麝香草酚蓝溶液 12mL
蒸馏水 1000mL
PH 7.4
制法
1. 葡萄糖发酵管按上述成分配好后,按0.5%加入葡萄糖,分装于有一个倒置小管的小试管内,121℃高压灭菌15min。
2. 其他各种糖发酵管可按上述成分配好后,分装每瓶1000 mL,121℃高压灭菌15min。另将各种糖类分别配好10%溶液,同时高压灭菌。将5mL糖溶液加入于100 mL培养基内,以无菌操作分装小试管。
注:
蔗糖不纯,加热后会自行水解者,应采用过滤法除菌。

试验方法:
从琼脂斜面上挑取小量培养物接种,于36℃±1℃培养,一般观察2~3d。迟缓反应需观察14~30d。

二、乳糖胆盐发酵管
成分:
蛋白胨 20g
猪胆盐(或牛、羊胆盐)5g
乳糖 10g
0.04%滇甲酚紫水溶液 25mL
蒸馏水 1000mL
制法:将蛋白胨,胆盐及乳糖溶于水中,校正pH,加入指示剂,分装每管10 mL,并放入一个小倒管,115℃高压灭菌15min。
注:
双料乳糖胆盐发酵管除蒸馏水外,其他成分加倍。

三、5%乳糖发酵管
成分:
蛋白胨 0.2g
氯化钠 0.5g
乳糖 5g
2%溴麝香草酚蓝水溶液 1.2mL
蒸馏水 100mL
pH 7.4
制法:除乳糖以外的各成分:溶解于50mL蒸馏水内,校正pH。将乳糖溶解于另外50mL蒸馏水内,分别灭菌121 ℃ 15min,将两液混合,以无菌操作分装于灭菌小试管内。
注:
在此培养基内,大部分乳糖迟缓发酵的细菌可于ld内发酵。


四、缓冲葡萄糖蛋白胨水(MR和VP试验用)
成分:
磷酸氢二钾 5g
多胨 7g
葡萄糖 5g
蒸馏水 1000mL
制法:溶化后校正pH,分装试管,每管1mL ,121℃高压灭菌15min。
甲基红(MR)试验:自琼脂斜面挑取少量培养物接种本培养基中,于36±1℃培养2~5d,哈夫尼亚菌则应在22~25℃培养。滴加甲基红试剂一滴,立即观察结果。鲜红色为阳性,黄色为阴性,甲基红试剂配法:10mg甲基红溶于30mL95%乙醇中,然后加入20 mL蒸馏水。
V-P试验:用琼脂培养物接种本培养基中,于36±1℃培养2~4d。哈夫尼亚菌则应在22~25℃培养。加入6%α-萘酚-乙醇溶液0.5mL和40%氢氧化钾溶液0.2mL充分振摇试管,观察结果阳性反应立刻或于数分钟内出现红色,如为阴性,应放在36±1℃下培养4h再进行观察。
五、营养明胶
成分:
蛋白胨 5g
牛肉膏 3g
明胶 120g
蒸馏水 1000mL
pH 6.8~7.0
制法:加热溶解,校正至pH7.4~7.6,分装小管,121℃高压灭菌10min,取出后迅速冷却,使其凝固,复查最终pH应为6.8~7.0。
试验方法:
用琼脂培养物穿刺接种,放在22~25℃培养,每天观察结果,记录液化时间。或放在36士1℃培养,每天取出,放冰箱内30min后再观察结果。

六、苯丙氨酸培养基
成分:
酵母浸膏 3g
DI-苯丙氨酸(或L-苯丙氨酸1g)2g
磷酸氢二钠 1g
氯化钠 5g
琼脂 12g
蒸馏水 1000mL
制法:加热溶解后分装试管,121℃高压灭菌15min,使成斜面。
试验方法:
自琼脂斜面上挑取大量培养物,移种于苯丙氨酸琼脂,在36士1℃培养4h或18~24h,滴加10%三氯化铁溶液2~3滴,自斜面培养物上流下,苯丙氨酸脱氨酶阳性者呈深绿色。

七、蛋白胨水(靛基质试验用)
成分:
蛋白胨(或胰蛋白胨)20g
氯化钠 5g
蒸馏水 1000mL
pH7.4
制法:按上述成分配制,分装小试管,121℃高压灭菌15min。
靛基质试剂
柯凡克试剂:将5g对二甲氨基苯甲醛溶解于75mL戊醇中,然后缓慢加入浓盐酸25ml。
欧-波试剂:将1g对二甲氨基苯甲醛溶解于95mL95%乙醇内,然后缓慢加入浓盐酸20 ml。试验方法:挑取小量培养物接种,在36士1℃培养1~2d,必要时可培养4~5d。加入柯凡克试剂约0.5mL,轻摇试管,阳性者于试剂层呈深红色;或加入欧-波试剂约0.5 mL,沿管壁流下,覆盖于培养液表面,阳性者于液面接触处呈玫瑰红色。
注:
蛋白胨中应含有丰富的色氨酸。每批蛋白胨买来后,应先用已知菌种鉴定后方可使用。

八、硫酸亚铁琼脂(硫化氢试验用)
成分:
牛肉膏 3g
酵母浸膏 3g
蛋白胨 10g
硫酸亚铁 0.2g
硫代硫酸钠 0.3g
氯化钠 5g
琼脂 12g
蒸馏水 1000 mL
制法:加热溶解,校正pH,分装试管,115℃高压灭菌15min,取出直立候其凝固。
试验方法:
挑取琼脂培养物,沿管壁穿刺,于36士1℃培养1~2d,观察结果。产硫化氢者使培养基变为黑色。
注:
肠杆菌科细菌测定硫化氢的产生,应采用三糖铁琼脂或本培养基。

九、尿素琼脂
成分:
蛋白胨 1g
氯化钠5g葡萄糖1g
磷酸二氢钾 2g
4%酚红溶液 3 mL
琼脂 20g
蒸馏水 1000 mL
20%尿素溶液 100mL
制法:将除尿素和琼脂以外的成分配好,并校正pH,加入琼脂,加热溶化并分装烧瓶。121℃高压灭菌15min。冷至50~55℃,加入经除菌过滤的尿素溶液,尿素的最终浓度为2%,最终pH应为7.2±0.1.分装于灭菌试管内,放成斜面备用。
试验方法:
挑取琼脂培养物接种,在36士1℃培养24h,观察结果。尿素酶阳性者由于产碱而使培养基变为红色。

十、氰化钾(KCN)培养基
成分:
蛋白胨10g
氯化钠 5g
磷酸二氢钾 0.225g
磷酸氢二钠 5.64g
蒸馏水 1000 mL
0.5%氰化钾溶液 20 mL
pH 7.6
制法:将除氰化钾以外的成分配好后分装烧瓶,121℃高压灭菌15min。放在冰箱内使其充分冷却。每100 mL培养基加入0.5%氰化钾溶液2.0mL(最后浓度为1:10000),分装于12mm*100mm灭菌试管,每管约4mL,立刻用灭菌橡皮塞塞紧,放在4℃冰箱内,至少可保存两个月。同时,将不加氰化钾的培养基作为对照培养基,分装试管备用。
十一、营养琼脂
成分:
蛋白胨10g
牛肉膏3g
氯化钠5g
琼脂15~20g
蒸馏水1000mL
制法:将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内,加入15%氢氧化钠溶液约2mL,校正pH至7.2~7.4。加入琼脂,加热煮沸,使琼脂溶化分装烧瓶,121℃高压灭菌15min。
注:
此培养基可供一般细菌培养之用,可倾注平板或制成斜面。如用于菌落计数,琼脂量为1.5%;如作成平板或斜面,则应为2%。

十二、营养肉汤
成分:
蛋白胨 10g
牛肉膏 3g
氯化钠 5g
蒸馏水 1000mL
pH7.4
制法:按上述成分混合,溶解后校正pH,分装烧瓶,每瓶225 mL ,121℃高压灭菌15min。
十三、缓冲蛋白胨水(BP)
成分:
蛋白胨 10g
氯化钠 5g
磷酸氢二钠 9g
磷酸二氢钾 1.5g
蒸馏水1000mL
pH 7.2
制法:按上述成分配好后以大烧瓶装,121℃高压灭菌15min。临用时无菌分装每瓶225mL。
注:本培养基供沙门氏菌前增菌用。
注:
本培养基供沙门氏菌前增菌用。

十四、EC肉汤
成分:
胰蛋白胨 20g
3号胆盐(或混合胆盐)1.5g
乳糖 5g
磷酸氢二钾 4g
磷酸二氢钾 1.5g
氯化钠 5g
蒸馏水 1000mL
制法:将上述成分混合,溶解后,分装有发酵倒管的试管中,121℃高压灭菌15min。最终pH为6.9±0.2。
十五、四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB)
基础培养基
多胨或眎胨 5g
胆盐 1g
碳酸钙 10g
硫代硫酸钠 3g
蒸馏水 1000mL
碘溶液
碘 6g
碘化钾 5g
蒸馏水 20 mL
制法:将基础培养基的各成分加入蒸馏水中,加热溶解,分装每瓶100mL。分装时应随时振摇,使其中的碳酸钙混匀,121℃高压灭菌15min备用。临用时每100mL基础培养基中加入碘溶液2mL,,0.1%煌绿溶液1mL。
十六、亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC)
成分:
蛋白胨 5g
乳糖 4g
亚硒酸氢钠 4g
磷酸氢二钠 5.5g
磷酸二氢钾 4.5g
L-胱氨酸 0.01g
蒸馏水 1000mL
1% L-胱氨酸-氢氧化钠溶液的配法:称取L-胱氨酸0.1g或(DL-胱氨酸0.2g),加1mol/L氢氧化钠1.5mL,使溶解,再加入蒸馏水8.5mL即成。
制法:将除亚硒酸氢钠和L-胱氨酸以外的各成分溶解于900mL蒸馏水中,加热煮沸,候冷备用。另将亚硒酸氢钠溶解于100mL蒸馏水中,加热煮沸,候冷,以无菌操作与上液混合。再加入1% L-胱氨酸-氢氧化钠溶液1mL。
分装于灭菌瓶中.每瓶100mL,pH应为7.0±0.1。
十七、亚硫酸铋琼脂(BS)
成分:
蛋白胨 10g
牛肉膏 5g
葡萄糖 5g
硫酸亚铁 0.3g
磷酸氢二钠 4g
煌绿 0.025g
柠檬酸铋铵 2g
亚硫酸钠 6g
琼脂 18~20g
蒸馏水 1000mL
pH 7.5
制法:
1.将前面5种成分溶解于300mL蒸馏水中。
2将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠另用50mL蒸馏水溶解。
3将琼脂于600mL蒸馏水中煮沸溶解,冷至80℃。
4将以上三液合并,补充蒸馏水至1000mL,校正pH,加0.5%煌绿水溶液5mL,摇匀,冷至50~55℃,倾注平皿。
注:
此培养基不需高压灭菌。制备过程不宜过分加热,以免降低其选择性。应在临用前一天制备,贮存于室温暗处,超过48h不宜使用。

十八、三糖铁琼脂(TSI)
成分:
蛋白胨 20g
牛肉膏 5g
乳糖 10g
蔗糖 10g
葡萄糖 1g
氯化钠 5g
硫酸亚铁铵 0.2g
硫代硫酸钠 0.2g
琼脂 12g
酚红 0.025g
蒸馏水 1000 mL
pH 7.4
制法:将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中,校正pH,加入琼脂,加热煮沸,以溶化琼脂。加入0.2%酚红水溶液12.5 mL,摇匀,分装试管。装量宜多些,以便得到较高的底层。121℃高压灭菌15min,放置高层斜面备用。
十九、三糖铁琼脂换用方法
成分:
蛋白胨15g
眎胨5g
牛肉膏 3g
酵母膏 3g
乳糖 10g
蔗糖 10g
葡萄糖 1g
氯化钠 5g
硫酸亚铁 0.2g
硫代硫酸钠 0.3g
琼脂 12g
酚红 0.025g
蒸馏水 1000 mL
pH7.4
制法:将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中,校正pH,加入琼脂,加热煮沸,以溶化琼脂。加入0.2%酚红水溶液12.5 mL,摇匀,分装试管,装量宜多些,以便得到较高的底层。121℃高压灭菌15min,放置高层斜面备用。
二十、嗜盐性试验培养基
成分:
蛋白胨2g
氯化钠 按不同量加
蒸馏水100 mL
pH7.7
制法:配制2%蛋白胨水,校正pH,共配制5瓶,每瓶100mL。每瓶分别加入不同量的氯化钠:(1)不加;(2)3g;(3)7g;(4)9g;(5)11g。待溶解后分装试管,121℃高压灭菌15min。


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