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[说明书] 免疫诊断——5μm链霉亲和素磁珠使用说明书

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发表于 2018-4-11 13:22 | 显示全部楼层 |阅读模式

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【产品名称】5μm链霉亲和素磁珠
【产品型号】MPS550/StreptavidinC5
MPS550.jpg
【目 号】ST04
【产品介绍】
EnrichingBeads® 链霉亲和素磁珠以免疫诊断磁珠为基础,将重组链霉亲和素共价偶联到形态规整、粒径均一的磁性聚苯乙烯微球表面形成单分子固定层,可用于生物素化核酸、抗体或其他生物素化配体和靶分子的分离和检测。形态确定的特异性表面便于进行高效捕获、分离和下游操作,批次一致性和结果的可靠重复性得到保证。
【规格&参数】
  
平均粒径
  
5μm
固形物浓度
10mg/mL
分散液
PBS, pH  7.4, 0.1%BSA,0.02%NaN3
游离生物素结合量
>900pmol/mg
生物素化寡核苷酸结合量
~200pmol  ss-oligonucleotides/mg
生物素化抗体结合量
~10μg /mg
【产品特点】
l   生物素结合位点丰富;
l   非特异性吸附低。
【作用对象】适用于生物素标记的蛋白、多肽、核酸、药物等生物配体液相捕获。
【有 期】两年(2~8 ℃保存)。
【试剂准备】
1. 核酸捕获
- B&W Buffer (2X):10mM Tris-HCl (pH 7.5), 1mM EDTA, 2M NaCl;
- B&W Buffer (1X):5mM Tris-HCl (pH 7.5), 0.5mM EDTA, 1M NaCl;
2. RNA捕获:
- Solution 1:0.1M NaOH, 0.05M NaCl(DEPC处理);
- Solution 2:0.1M NaCl(DEPC处理);
3. 蛋白/抗体捕获:
- PBS Buffer, pH 7.4 (or PBST Buffer, PBS pH 7.4, 含0.01%(v/v) Tween 20;or PBS/BSA Buffer, PBS pH 7.4, 含0.1%(v/v) BSA)。
【耗材准备】ep管(如进行RNA捕获,请使用无RNA酶ep管),磁力架。
【操作流程】
1.    磁珠预处理
1.1根据【规格&参数】表中生物配体结合量参数,计算磁珠使用体积(建议最小使用量不要少于20ul,取样太少易导至不同次加入的磁珠体积不一致);
1.2将磁珠重悬均匀(e.g.涡旋震荡30s,吹打或旋转混合5min。磁珠重悬方法下同),并转移所需要的磁珠体积至一支全新ep管中;
1.3加入等体积(或至少1mL)B&W Buffer (1X) (核酸捕获)或PBS Buffer(蛋白/抗体捕获),将磁珠重悬均匀;
1.4使用磁力架磁吸至磁珠吸附完全,吸弃上清液;
1.5重复step 1.31.4三次。
2.    DNA捕获
2.1向step 1.5 ep管中加入双倍原始磁珠体积的B&W Buffer (2X)
2.2加入等体积的生物素化DNA的去离子水溶液至上述ep管中;
2.3室温温柔旋转混匀,孵育20~30min;
2.4磁性分离,吸弃上清液;
2.5使用B&W Buffer (1X)清洗上述磁珠-核酸复合物2~3次;
2.6直接进行后续核酸释放实验,或加入一定体积B&W Buffer (1X)重新分散、待用。
3.    RNA捕获
3.1向step 1.5 ep管中加入大于磁珠原始体积的Solution 1,涡旋振荡2min,磁吸并吸弃上清液(该清洗步骤操作两次);
3.2使用Solution 2,按照step 3.1的方法,清洗磁珠1次;
3.3将磁珠重新分散于双倍原始体积的Solution 2中;
3.4加入等体积的生物素化RNA的去离子水溶液至上述ep管中;
3.5室温温柔旋转混匀,孵育20~30min;
3.6磁性分离,吸弃上清液;
3.7使用Solution 2清洗上述磁珠-核酸复合物2~3次;
3.8直接进行后续核酸释放实验,或者加入用一定体积Solution 2重新分散待用。
4.    蛋白/抗体捕获
4.1向step 1.5 ep管中加入一定体积PBS Buffer和生物素化的蛋白或者抗体溶液;
4.2室温温柔旋转混匀,孵育30min;
4.3 磁性分离,吸弃上清液;
4.4 使用PBS/BSA Buffer清洗3~5次;
4.5 用一定体积的PBS Buffer 进行保存。
5.    核酸或者蛋白的释放
5.1核酸释放
step 2.63.8的ep管磁性分离吸弃上清液,然后用10mM EDTA, pH 8.2, 95%甲酰胺溶液在65℃下孵育5min(或者90℃下孵育2min),可以将生物素化核酸与磁珠实现分离;
5.2 蛋白/抗体释放
将磁珠与生物素化蛋白复合物用用0.1% SDS溶液煮沸5min可以将生物素化蛋白从磁珠上解离。
【其它】
该产品可配合英芮诚核酸提取仪(订货号ETP-300)进行自动化操作,也可以配合多功能磁力架(订货号CQT-0011)、16位磁力架(订货号CQT-0001)、手动磁性萃取指套(订货号CQT-0008)进行手动操作。

1:洗脱条件参考表
洗脱温度和时间
洗脱溶液
洗脱效率
90 for 10min
10mM  EDTA pH8.2 and 95%甲酰胺
96.8%
90 for 5min
10mM  EDTA pH8.2 and 95%甲酰胺
96.4%
90 for 2min
10mM  EDTA pH8.2 and 95%甲酰胺
96.0%
65 for 5min
10mM  EDTA pH8.2 and 95%甲酰胺
96.4%
65 for 2min
10mM  EDTA pH8.2 and 95%甲酰胺
97.9%
37 for 10min
10mM  EDTA pH8.2 and 95%甲酰胺
41.9%
90 for 10min
H2O
7.3%
90 for 10min
10mM  EDTA pH8.2
52.0%
90 for 10min
95%甲酰胺
35.9%
90 for 10min
30mM  NaOAc pH 9.0 95%甲酰胺
95.5%
90 for 10min
80mM  NaOAc pH 9.0 95%甲酰胺
97.3%
90 for 10min
140mM  NaOAc pH 9.0 95%甲酰胺
95.4%



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