IVD知识文库系列-11.9微生物检测の艰难梭菌

纳兰烙烙

编者按：

本次章节新增篇章，为艰难梭菌的科普篇章。

包含了：成人艰难梭菌共识及梅里埃相关产品的解读。

关键词：艰难梭菌、专家共识、梅里埃。

其意义在于站在市场的视角去了解艰难梭菌检测的侧重点，从“独角兽”梅里埃的产品角度去解读艰难梭菌的推广特色。

小编语录：以专家共识的角度去知道一线客户的使用习惯，从而完善研发立项。

从“独角兽”梅里埃的角都去探索产品的特点，从而优化研发升级。

引入阴性预测值NPV和阳性预测值PPV的概念，98%阴性预测值上一次出现的项目叫做HPV，又名人乳头瘤病毒。

用临床听得懂的话去描述产品，有助于上量，更有助于产品的推广。

而NPV对于预筛的价值最大，在两步法之中，谷氨酸脱氢酶（GDH)阴性预测值95%-100%，毒素ELA 阴性预测值98%。

GDH+毒素ELA可以排除艰难梭菌感染，临床价值在于阴性预测值≥98%。

一

什么是艰难梭菌？

艰难梭菌(Clostridium difficile, CD)是一种革兰阳性、产毒素或非产毒素的厌氧芽孢杆菌,其中产毒性CD 是院内肠道感染的主要致病菌之一。

艰难梭菌感染(Clostridium difficile infection, CDI)多发生于应用抗菌药物的老年患者,临床上轻者引起腹泻,严重者引起假膜性肠炎,甚至死亡。

近年来，CDI的发生率和病情严重程度不断增高，识别由艰难梭菌引起的AAD仍是临床上的一个难点，粪移植为复发型CDI的治疗带来突破性进展。

美国医疗保健流行病学学会／美国感染病学会(SHEA／IDSA)2010年 、欧洲临床微生物与感染性疾病学会(ESCMID)2009年 、2013年，美国胃肠病学会(ACG)2013年均发表了CDI的诊疗指南。

中国于2017年发表《中国成人艰难梭菌感染诊断和治疗专家共识》。

附：各国CDC疾控数据。

美国疾病控制和预防中心（CDC) 在 2013 年发布的统计数据显示： 美国每年CDI患者超过2 5 万，其中至少1 .4万人死于该种疾病。加拿大CDI发病率从1997年的3. 8/万住院日上升至2005年的9. 5/万住院日。2007至2008年中国上海一家医院的研究发现，其住院患者CDI的发病率为17. 1/万住院患者。

在中国，引起感染的CD有其独特的流行病学特征，主要流行菌株为 RT017 (ST3 7 )，RT046 (ST3 5 ) 和 RT012(ST54)。而中国健康人分离的CD则以多位点序列分型ST5 4 、ST3 和ST2 为主。

二

艰难梭菌的易感人群及临床治疗思路

发病机制:

艰难梭菌感染CDI既需要获得艰难梭菌，也需肠道微生物群存在破坏。艰难梭菌引起症状性感染的确切机制，尚不清楚。 这种微生物是非侵袭性的，产生毒素是致病的关键（非产毒艰难梭菌菌株不引起腹泻）。

毒素通过微管及细胞间紧密连接破坏上皮完整性，引起诸如IL-8等炎性介质的释放。这些作用促进结肠黏膜的炎性浸润、促进引起腹泻的液体转移，促进上皮坏死。

易感人群：

抗生素破坏微生态，增加CDI危险。

CDI相关的其他因素包括年龄较大、近期住院、住院时间较长、应用多种抗生素、抗生素疗程较长、质子泵抑制剂、化疗、慢性肾脏病及饲喂管。

实验室诊断：

临床治疗：

1.艰难梭菌感染（CDI）要求存在腹泻（24小时内不成形大便≥3次）或肠梗阻或中毒性巨结肠的影像学证据；以及粪便产毒艰难梭菌或其毒素检查结果阳性，或有假膜性结肠炎的结肠镜或组织病理学证据。

2.实验室检查不能区分定植与感染。

3.仅应在有症状的患者中行CDI检测。

4.CDI诊断检查策略不一。针对液体粪便样本，采用集合酶链反应（PCR）检测毒素基因的多步法或单步法PCR法，敏感性及特异性最高。

4.不推荐在CDI治疗后进行（判断是否）治愈的检查。

三

常见的艰难梭菌检测方法

（资料来源《中国成人艰难梭菌感染诊断和治疗专家共识》）

1 . 粪便标本采集

一般情况下，仅需对稀便、水样便或半成形便进行CD检测。

对于疑似有CD感染及肠梗阻的患者，应通过直肠拭子进行检测。

在出现明显腹泻症状（>3次/24h、持续超过2d) 及进行针对性治疗前，采集不成形粪便标本（推荐10~20ml，不少于5 ml) 送检。CD毒素室温下易降解，应于取材后2h内送检并立即检测；如不能立即检测，则需将标本置于4丈冰箱保存，不超过3d。

2 . 艰难梭菌菌株检测

( 1 ) 培养

常米用 CCFA ± 培养基（CCFA) 或CD显色培养基进行厌氧培养。CCFA培养基需培养48-72h，对粪便标本通过加热或乙醇预处理可以减少粪便正常菌群，筛选出细菌芽孢。

( 2 )谷氨酸脱氢酶检测

谷氨酸脱氢酶（GDH)是所有CD高水平表达的代谢酶，可用于筛查疑似CDI患者粪便样本中是否存在CD。

通常使用酶免疫方法EIAs 直接检测粪便标本中的GDH抗原。检测时间约1-2h，操作简便且成本较低。

系统综述显示该试验具有较高的敏感度〉90% 、特异性> 90%和阴性预测值95%-100% ，但同CD培养一样，不能区分菌株是否产生毒素。

3 . 艰难梭菌毒素检测

( 1 ) 细胞毒性试验

细胞毒性试验（CCTA) ，即细胞毒性中和试验（CCNA) ，用于直接检测粪便标本中存在的CD毒素。

CCTA是实验室诊断CD的金标准，特异性强，敏感度高，最低可检测出10pg毒素，但需要细胞培养及显微镜观察的相应设施和技术，操作繁琐，耗时长48-72h。

( 2)产毒素培养

产毒素培养（TC) 用于检测CD菌株的产毒素能力。将不成形稀便标本接种于CCFA，培养基或CD显色培养基上，厌氧培养至少48 h，挑取典型菌落接种至液体培养基中，厌氧培养48 h，也可用EIAs检测固体培养基上菌落产毒素能力，检测时间可缩短至2 -3d，但敏感度稍低。

( 3 ) 毒素免疫检测

目前常用EIAs直接检测腹泻粪便标本中的CD毒素，用单克隆抗体特异性结合CD A/ B 毒素蛋白进行检测。EIAs检测毒素的优点是特异性高（>90%) ，能区分产毒株和非产毒株，并且检测周期短，数小时即可出结果，操作简便。

目前， eias检测CD毒素常和GDH检测或核酸扩增技术（NAATs) 联合应用，用于CD感染实验室两步法或三步法诊断。

4 . 艰难梭菌毒素基因检测

可采用实时PCR或环介导等温扩增法（LAMP) 等分子生物学技术，定性检测粪便样本中的CD毒素基因。商品化的检测系统包括 GeneXpert ( Cepheid，美国）、FilmArray(梅里埃，法国）等，此类方法将样品提取、纯化、核酸扩增、产物自动化检测整合，通常可在2h内完成检测。

四

“独角兽”梅里埃在艰难梭菌的应用

（资料来源百度文库）

“独角兽”梅里埃在艰难梭菌检测类项目所提供的是一个套餐形式，全方位个性化的整体解决方案。

从检测试剂类产品方向来看，用一线临床的术语来说，是涉及到了预筛（筛查），诊断（毒性检测、细菌培养）、鉴别诊断（鉴定）、预后与个性化用药（细菌药敏）、跟踪随访（监测）。

从产品条线，用一张流程图，一目了然的告诉医院临床科室，“独角兽”梅里埃的产品涵盖了临床各个阶段的需求点。

引入阴性预测值NPV和阳性预测值PPV的概念，98%阴性预测值上一次出现的项目叫做HPV，又名人乳头瘤病毒。

用临床听得懂的话去描述产品，有助于上量，更有助于产品的推广。

而NPV对于预筛的价值最大，在两步法之中，谷氨酸脱氢酶（GDH)阴性预测值95%-100%，毒素ELA 阴性预测值98%。

GDH+毒素ELA可以排除艰难梭菌感染，临床价值在于阴性预测值≥98%。

从检测仪器类产品方向来看，用一线检的术语来说，是涉及到了急诊筛查（IDAS+CDAB），检验公认金标准诊断（chromID™ C. difficile agar）、快速鉴别诊断（VITEK® 2 ANC card+API® 20A & rapid ID 32A）、预后与个性化用药（ATB™ ANA+DiversiLab® C. difficile）。

从产品条线，用一张流程图，一目了然的告诉医院检验科室，“独角兽”梅里埃的产品涵盖了临床各个阶段的需求点，并且是全自动化的产品，保证了产品的快速与智能兼备。

五

“独角兽”梅里埃为客户规划一份建议书

（资料来源百度文库）

用政策和行业数据描述微生物实验室现状

以“蚁穴”—标本培养导入微生物建设的规范性和必要性

一句话概括临床工作核心，以工作中心来凸显梅里埃产品的价值点

革兰染色的质量就是报告的质量基础

经济又全面的药敏是微生物鉴定的需求点

中小型医院的药敏可当日报告亦是需求

来源：小桔灯网  作者：纳兰烙烙

转载需联系Q.Q：31339393授权！