IVD产品经理系列-生化知识细说之血凝

纳兰烙烙

血凝相关

小桔灯提供了知识文库的服务，这周分享的是第八部分8.生化检测，今天将提到涉及到凝固法、底物显色法、免疫学法、干化学法、免疫比浊法等处于临床检验和生化检验的项目--血凝相关检测

血凝相关检测是什么？

参考《化验单解读培训（血凝分析部分）》丽水人民医院

血液凝固（凝血）

形态：血液由液体状态转变为凝胶状态。

本质：纤维蛋白原（可溶）变为纤维蛋白（不溶）。

基本学说：凝血瀑布学说（血液凝固是一系列凝血因子酶反应过程；每个凝血因子都被其前一因子所激活；最后激活凝血酶原生成凝血酶；凝血酶使纤维蛋白原转变为纤维蛋白，生成纤维蛋白凝块。

一期止血:是指血管和血小板参与形成初级血栓的凝血过程（血管期，细胞期）。

二期止血:由血浆凝血因子相继酶解激活，最终生成凝血酶，形成纤维蛋白的凝血过程（血浆期）。

也就是说，血液在体内流动，是因为存在着凝血与抗凝，纤溶与抗纤的平衡。

比如：假设某处血管损伤，首先血管收缩和血小板附着，形成一期止血；同时凝血因子活化形成纤维蛋白，与血小板等共同在创口处形成的止血，即二期止血。

迄今已证实有14个因子参与凝血过程,除Ca++外,都是蛋白质．

正常血液中，除组织因子，都可以在血浆中找到。以罗马数字命名除激肽系统外的凝血因子，其中Ca++为Ⅳ。在书写和拼读上，Ca++不叫Ⅳ；纤维蛋白也不称为因子Ｉ。

合成场所：大部分且主要在肝脏，其他内皮细胞，巨核细胞。

VitK依赖因子：在VitK缺乏情况下，形成的因子无凝血活性，即VitK缺乏时，因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ｘ活性降低。

接触系统因子：通过这些因子接触固相表面激活。因子Ⅻ、Ⅺ、PK、HMWK。

凝血酶敏感因子：这部份因子对凝血酶特别敏感。因子Ｉ、Ｖ、Ⅷ、XIII。

了解了凝血因子，我们看一下”相继激活”怎么理解。

大家都知道，多米诺骨牌，只要用很小的力量去推一下第一张牌，然后第一张就会推到第二张，第二张推倒第三张，一此推到最后，同样，凝血因子就象一串骨牌，比如右边是XII因子，激活后可以激活XI因子，一直到纤维蛋白形成。

因此，凝血酶激活是一系列酶相继激活的过程，而不是单一因子的反应。

凝血系统有两条途径，均可导至纤维蛋白的产生，这就是所谓的内源、外源途径。

内源性途径：指参与凝血的因子全部来自正常血液中存在的凝血蛋白和Ca＋＋ 。

外源性途径：指参与凝血的因子不完全来自正常血液中，部分由组织中进入血液。

我们把上图稍作简化，成为这张图。

这张图绿色区域是共同途径，主要包括了I、II、V、X因子的作用过程。

紫色区域是外源性途径部份，主要包括了TF、VII因子。

在休外模拟外源性途径启动凝血，直到纤维蛋白形成的凝固过程即我们常规检测的PT，因此，PT的延长或缩短表示外源性途径因子的活性减少或增加。

同样，APTT也如此。

TT是反应在凝血酶作用下，纤维蛋白原形成纤维蛋白的过程，因此，TT的延长表示纤维蛋白原量的减少或功能缺陷,或抗凝物增加。

纤维蛋白分解产生继发性纤溶标志性产物DD，因此DD的升高，表示有继发性纤溶的存在。

抗凝系统

抗凝血酶

蛋白C系统

组织因子途径抑制物（TFPI）

病理性抗凝蛋白（类肝素物质、狼疮抗凝物质(LA)、凝血因子Ⅷ抑制物）

纤维蛋白溶解系统

纤溶酶原（PLG）在纤溶酶原激活剂（PA）作用下转变成纤溶酶（PL），PL进而降解纤维蛋白（原）和其他蛋白质的过程。

因此机体的止血和凝血功能主要由血管、血小板、凝血因子、抗凝物质及纤维蛋白溶解系统共同完成。

止血功能主要由血管、血小板参与；

凝血功能主要由凝血因子参与；

抗凝血功能主要由抗凝物质和纤溶系统参与。

血凝相关检测都是什么项目？

凝血酶原时间（PT）

活化部分凝血活酶时间（APTT）

凝血酶时间（TT）

血浆纤维蛋白原（Fbg）

抗凝血酶-Ⅲ（AT-Ⅲ）

纤维蛋白/纤维蛋白原降解产物（FDP）

纤溶酶原活性（PLG）

D-二聚体（D-D）

血凝相关检测项目的临床意义

（一）凝血酶原时间 -- PT

PT是用于筛查外源性凝血系统（Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ）及口服抗凝药物剂量（如华发令、双香豆素等）的检测项目

1.参考范围

凝血酶原时间（PT）：10-14s患者结果超过正常对照3s以上为异常

凝血酶原比率（%）：0.8-1.3

国际标准化比值（INR）：0.85-1.3

2. PT延长：

见于先天性凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ缺乏；低（无）纤维蛋白原血症；获得性见于急性DIC消耗性低凝期、原发性纤溶症、维生素K缺乏、广泛而严重的肝脏实质性损伤（如急性重症肝炎及肝硬化）、血循环中有抗凝物质（如口服抗凝剂、肝素）

3. PT缩短：

见于先天性凝血因子V增多、口服避孕药、高凝状态（DIC早期、急性心肌硬塞等）、血栓性疾病（脑血栓形成、急性血栓性静脉炎）、多发性骨髓瘤、洋地黄中毒、乙醚麻醉后等

4. 监测口服抗凝药（如华发令、双香豆素等）的重要指标

一般要求PT：18-24 S INR：2.5-3.5，不同疾病不同值。

口服抗凝剂“华发令”，预期值约为参考值的2倍，PT活动度参考值为75%-120%，降低到＜40%可能有出血倾向。

（二）活化部分凝血活酶时间 -- APTT

APTT常用于内源性凝血系统（Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ因子）的筛选及肝素抗凝治疗的监测。

1.参考范围：

20-35s（患者结果超过正常对照10s以上为异常）

2. APTT延长：

见于先天性凝血因子缺乏（如血友病甲、乙，接触因子Ⅷ、Ⅺ、Ⅻ缺乏、VWF等）；多种凝血因子缺乏（如严重肝病、维生素K缺乏、DIC、纤溶亢进等）；血液中有抗凝物质存在

3. APTT缩短：

见于凝血因子Ⅷ、Ⅹ活性增高、血小板增多症、高凝状态（DIC高凝期）、不稳定性心绞痛、脑血管病变、糖尿病血管病变、脑梗塞、深静脉血栓、妊趁高血压综合症和肾炎综合症，静脉穿刺不顺利混入组织液

4. 是监测肝素治疗的首选指标：

肝素抗凝治疗中APTT的预算期为正常值的1.5-2.5倍

（三）凝血酶时间 -- TT

1. 参考范围：14-21s

2. TT延长：

见于原发性或继发性纤溶亢进（如DIC）时，故TT是一项常用的纤溶活性筛选实验；另外，普通肝素治疗或血栓性疾病溶栓治疗时，TT也显著延长

3. TT缩短：

常见于血样本有微小凝块或钙离子存在及PH呈酸性时

（四）血浆纤维蛋白原 -- Fbg

1.参考范围： 2-4g/L

2. Fbg含量增高：

Fbg是急性时项反应蛋白，也是红细胞沉降速率增快的主要血浆因素。在组织坏死和炎症时，Fbg在24小时内增高数倍；妊娠和使用激素，冠状动脉粥样硬化性心脏病，脑血管病，糖尿病，恶性肿瘤等，Fbg均可增高

3. Fbg含量减少：

肝脏疾病(重症肝炎，慢性肝炎，肝硬化等);DIC消耗性低凝血期及纤溶期，原发性纤维蛋白原缺乏症，原发性纤溶活性亢进，恶性贫血及肺、甲状腺、子宫、前列腺手术等

（五）抗凝血酶 -- AT-Ⅲ

1. 参考范围：75-135%

2.AT-Ⅲ是血浆中最重要的生理性抗凝物质，约占血浆中总抗凝血酶活性的50%-70%。肝素作用于AT-Ⅲ的赖氨酸残基而使抗凝血酶活性增强1000倍。

3.AT水平减低：

AT缺乏是发生静脉血栓与肺栓塞的常见原因之一，但与动脉血栓形成关系不大

遗传性AT缺乏：遗传性AT缺乏是一种常染色体显性遗传性疾病

获得性AT缺乏：

（1）合成降低，主要见于肝硬化、重症肝炎、肝

癌晚期等

（2）丢失增加，见于肾病综合征

（3）消耗增加，见于血栓前期和血栓性疾病，如心脑血管疾病、DIC、脓毒血症、外科手术后、深静脉血栓形成、肺梗死、妊高症等

4.AT水平增高：

在血友病、口服抗凝药物、使用黄体酮类药物时，AT水平增高

（六）纤维蛋白/纤维蛋白原降解产物 -- FDP

1. 参考范围：<5μg/mL

2. FDP增高：

见于原发性纤溶症、DIC、恶性肿瘤、急性早幼粒细胞白血病、肺栓塞、深静脉血栓形成、肾脏疾病、肝脏疾病、器官移植的排斥反应、溶栓治疗等

（七）纤溶酶原活性 -- PLG

1. 参考范围：75-150%

2. PLG增高：

表明纤溶活性减弱，见于血栓前状态或血栓性疾病

3. PLG降低：

表明纤溶活性增高，见于肝病、DIC及治疗性纤溶等患者

（八）D-二聚体 – D-D

1. 参考范围：0-550 μg/L

2. D-二聚体广泛应用于血栓疾病的诊断和溶栓治疗的监测。其水平升高多见于深静脉血栓（DVT）、肺栓塞（PE）、弥散性血管内凝血（DIC），另外，妊娠时D-二聚体也有升高，但很高的D-二聚体水平则预示伴有并发症，如先兆子痫。

血凝相关检测项目的常见问题及解决方法

（一）标本质量常见问题

1. 标本采集为3.2%柠檬酸钠0.3ml + 静脉血2.7ml，采血量过多或过少会影响检测结果的准确性

2. 凝血、溶血、高血脂标本会影响检测结果的准确性

解决方法：

对抗凝剂不符合，采血量不准确，凝固，溶血，脂血标本

（二）标本运输与保存

1. 标本应戴盖运输与存放

2. 全血标本2小时内离心，；离心条件为3000r/min×15min；4小时之内检测

3. 标本储存的时间

2~8 ℃<4小时

-20 ℃<2周

-70 ℃<6个月

如果标本放置时间过长，会使检测结果受到影响

（三）危急值报告

1、凝血酶原时间（PT）>25S

2、凝血酶原国际标准化比率（INR）>4.5

3、活化部分凝血活酶时间（APTT）>70S

4、纤维蛋白原定量（Fbg）<1.0 g/l

（四）标本采集制备注意事项

1.抗凝剂的选取及用量

1.1抗凝剂的选取：以选用肝素作为抗凝剂为宜。草酸盐或枸橼酸钠等可引起细胞皱缩，影响红细胞的聚集性和变形能力，导至血液粘度增高，故不宜使用。

1.2 抗凝剂的用量要适量：

☆注意：抗凝剂用量不可过大，尽量减少对血液的稀释作用；抗凝剂用量不可过小，否则达不到抗凝效果。

2.样本的采集

2.1时间: 一般宜清晨空腹安静状态下采血。

2.2部位: 采血时，取坐位，取肘前静脉血。

2.3采血时尽可能缩短静脉阻滞时间，针头刺入血管后，立即松开压脉带，安静约5秒再开始采血。

2.4采血过程不宜太快，应避免剪切力对红细胞可能造成的损伤。为此，采血针头的内径以较大为好(最好选用7号以上的针头)。采血时抽力不宜过大，以免血液流经针头时受到异常的剪切力。

2.5标本混匀：采血后，旋下注射针头，将血液沿试管壁缓慢注入试管中，然后用手握住试管中部搓动或在桌面上做圆周滑动，以使血液充分和抗凝剂混匀，以免凝血，但要避免剧烈振摇，以免溶血。

3.样本放置

3.1放置温度：标本不能在0℃以下保存，在冰冻条件下，将影响血液的生理状态和流变特性。所以，血样一般在室温(15℃－25℃)贮存。

3.2放置时间：在室温条件下标本一般在4小时内完成测试工作，但若取血后立即进行测试，则所测结果偏低，因此，取血后静置20分钟后进行测定为适宜。

3.3标本不能在0℃以下冰冻保存。特殊情况血样必须延长存放时间时，应将标本放入4℃冰箱中，保存时间一般不超过12小时。存放标本在测试前要充分摇匀，在结果报告中应注明保存条件。

血凝相关检测项目的检测方法

1、Prothrombin time（PT）-凝血酶原时间测定（外源性凝血途径检测）。

2、Activated Partial Thromboplastin Time（APTT）-活化部分凝血活酶时间测定（内源性凝血途径检测）。

3、Thrombin Time（TT）-凝血酶时间测定（共凝血途径检测）。

4、特殊物质检测（检测引起凝血功能异常的原因）：Fibinogen（FIB）-纤维蛋白原测定。

以上即为血凝常规四项检测。PT、APTT、TT为定性检验，FIB为定量检测。

血凝相关检测项目的检测仪器-血凝仪

血液凝固分析仪（automated coayulation analyzer,ACA）是采用一定分析技术，对血栓与出血有关成分自动检测的临床常规检验仪器

在血栓/出血实验室中最基本的设备就是血液凝固分析仪（简称血凝仪）。

血凝仪主要检测方法：凝固法、底物显色法、免疫学法、干化学法等。

1．凝固法原理

是通过检测血浆在凝血激活剂作用下发生一系列物理量（光、电、超声、机械运动等）的变化，再由计算机分析所得最终结果，称生物物理法。按测量原理分为电流法、超声分析法、光学法和磁珠法四种。

光学法（比浊法）：是根据血浆凝固过程中浊度的变化，导至光强度变化来测定相关因子。

双磁路磁珠法原理：测试杯的两侧各有一组驱动线圈，产生恒定的交替电磁场，使杯内去磁小钢珠保持等幅振荡运动；凝血激活剂加入后，随着纤维蛋白的增多，血浆黏稠度增加，小钢珠运动振幅逐渐减弱，将运动幅度衰减到50%时确定为凝固终点 。

双磁路磁珠法与光学法原理主要区别：

前者是检测血浆凝固过程中磁电信号变化

后者是检测该过程中光信号的变化

2.底物显色法原理： 实质为光电比色原理，是通过测定产色底物的吸光度变化来推测所测物质的含量和活性，也称生物化学法 。

3.免疫学法原理 以纯化的被检物质为抗原，制备相应的抗体，然后利用抗原抗体反应对被检物进行定性或定量测定。血凝仪使用免疫比浊法。

血凝相关检测项目的检测仪器-血凝仪对比

（一）血凝仪基本结构

1.半自动血凝仪基本结构

主要由样本预温槽和试剂预温槽、加样器、检测系统（光学、磁场）及微机组成 。

2.全自动血凝仪基本结构

包括样本传送及处理装置、试剂冷藏位、样本及试剂分配系统、检测系统、计算机、输出设备及附件等。

（二）血凝仪评价

1.一般性评价：

①产品质量50%；

②价格25%；

③厂商评估10%；

④担保5%；

⑤售后服务5%；

⑥可接受性5%。

2.技术性能评价：

重复性测定、线性范围、准确性、携带污染率、干扰因素、可比性分析等几方面。

（三）血凝仪的特点

1.半自动血凝仪：

①手工加样加试剂；

②操作简便；

③应用检测方法少；

④价格便宜；

⑤速度慢；

⑥测量精度好于手工，但低于全自动

2.全自动血凝仪：

①自动化程度高；

②检测方法多；

③通道多，速度快；

④项目任意组合，随机性；

⑤测量精度好，易于质控和标准化；

⑥智能化程度高，功能多；

⑦价格昂贵；

⑧对操作人员的素质要求高

（一）半自动血凝仪的维护

①保持测试槽清洁，严禁有异物进入；

②避免阳光直晒和远离强热物体；

③防止受潮和腐蚀；

④仪器和加珠器都必须远离强电磁场干扰源；

⑤电源电压为220V±10％，最好使用稳压器；

⑥使用一次性测试杯及钢珠

（二）全自动血凝仪的维护

①清洗或更换空气过滤器；

②检查及清洁反应槽；

③清洗洗针池及通针；

④检查冷却剂液面水平；

⑤清洁机械运动导杆和转动部分并加润滑油；

⑥及时保养定量装置；

⑦更换样品及试剂针；

⑧数据备份及恢复等

小编将会在知识文库生化专栏

陆续为大家数字解析当前热门生化项目哦，尽情期待。